| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第一部分 抑制性调控在斑马鱼会聚延伸运动模式形成中的作用 | 第15-87页 |
| 第一章 引言 | 第15-39页 |
| ·原肠形态发生在胚胎发育中的作用 | 第15-18页 |
| ·原肠形态发生中的细胞运动方式 | 第15-16页 |
| ·斑马鱼的原肠形态发生 | 第16-18页 |
| ·会聚延伸运动在原肠形态发生中的作用 | 第18页 |
| ·会聚延伸运动的调控机制 | 第18-24页 |
| ·Wnt/PCP信号途径对CE运动的调节 | 第18-21页 |
| ·Stat3在CE运动和Wnt/PCP信号途径中的作用 | 第21-22页 |
| ·前后轴极性(AP polarity)对会聚延伸运动的调控 | 第22-24页 |
| ·BMP浓度梯度在会聚延伸运动中的作用 | 第24页 |
| ·各种粘连因子在会聚延伸运动中的作用 | 第24-28页 |
| ·整合素-纤连蛋白对CE运动的调节 | 第25-26页 |
| ·钙黏蛋白对CE运动的影响 | 第26页 |
| ·原钙黏蛋白对CE运动的影响 | 第26-27页 |
| ·Flamingo对CE运动的调控 | 第27-28页 |
| ·PAPC在原肠形态发生中的功能和作用机制 | 第28-32页 |
| ·PAPC在CE运动中的功能和作用机制 | 第28-30页 |
| ·PAPC的时空表达模式 | 第30-32页 |
| ·flh和spt在中胚层背腹分化中的作用和相互关系 | 第32-33页 |
| ·flh和spt控制papc空间表达模式的形成 | 第33-34页 |
| ·vsx1在早期胚胎发育中的作用 | 第34-37页 |
| ·vsx1基因及其结构特征 | 第34-35页 |
| ·vsx1基因的时空表达模式 | 第35-36页 |
| ·vsx1基因在胚胎发育中的功能 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 第二章 斑马鱼vsx1通过限定flh的背部表达在调控原肠形态发生中发挥关键作用 | 第39-65页 |
| ·前言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-53页 |
| ·溶液配制 | 第40-41页 |
| ·斑马鱼胚胎的获得 | 第41页 |
| ·斑马鱼胚胎受精膜的去除 | 第41-42页 |
| ·不同发育时期胚胎材料的收集 | 第42页 |
| ·实时定量PCR检测斑马鱼胚胎发育早期vsx1基因的表达 | 第42-45页 |
| ·重组载体的构建 | 第45-47页 |
| ·体外capped mRNA的制备 | 第47-49页 |
| ·反义吗啉环寡核苷酸(antisense morpholino oligos,MO) | 第49页 |
| ·显微注射与胚胎培养 | 第49-50页 |
| ·制备反义RNA探针 | 第50-52页 |
| ·整胚原位杂交(whole-mount in situ hybridization) | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-63页 |
| ·斑马鱼胚胎发育早期vsx1基因的表达 | 第53-54页 |
| ·斑马鱼vsx1在原肠形态发生中具有重要作用 | 第54-59页 |
| ·ZF vsx1对flh,spt和papc空间表达模式的影响 | 第59-60页 |
| ·ZF vsx1直接抑制flh的转录和表达 | 第60-62页 |
| ·flh的异位表达以及spt的表达抑制是原肠阻滞的主要原因 | 第62-63页 |
| ·小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第三章 β-catenin的目标基因boz通过直接抑制vsx1的转录保护flh在组织者中的表达 | 第65-77页 |
| ·前言 | 第65-66页 |
| ·材料与方法 | 第66-69页 |
| ·体外转录ZF boz capped mRNA | 第66-67页 |
| ·合成ZF boz MO | 第67页 |
| ·GFP报告基因重组质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·荧光显微镜观察GFP的表达 | 第68页 |
| ·实时定量PCR | 第68-69页 |
| ·实验结果 | 第69-75页 |
| ·ZF boz调控组织者的形成 | 第69-70页 |
| ·ZF boz对于flh在组织者中的表达是必需的 | 第70-71页 |
| ·ZF boz过表达抑制内源vsx1的表达 | 第71页 |
| ·Boz通过结合vxvJ启动子上紧密串联的结合位点直接抑制vsxl基因的转录 | 第71-73页 |
| ·boz通过抑制vsjci的转录保护lfh的表达 | 第73-75页 |
| ·小结与讨论 | 第75-77页 |
| 第四章 vsx1和boz可能参与Wnt8a和Bmp2b信号途径对flh在侧腹中胚层的表达抑制 | 第77-85页 |
| ·前言 | 第77-78页 |
| ·材料与方法 | 第78-79页 |
| ·构建载体 | 第78页 |
| ·反义寡核苷酸 | 第78-79页 |
| ·实验结果 | 第79-82页 |
| ·ZF vsx1不能抑制boz的表达 | 第79页 |
| ·Wnt8a和Bmp2b信号途径被抑制后flh的异位表达是由vsx1介导的 | 第79-81页 |
| ·vsx1过表达和功能抑制不影响vent,vox和ved的表达 | 第81-82页 |
| ·小结与讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 主要结论和进一步的研究设想 | 第85-87页 |
| ·本研究的主要结果和结论 | 第85-86页 |
| ·进一步的研究设想 | 第86-87页 |
| 第二部分 卵子发生过程中ntl启动子的甲基化修饰抑制母本ntl等位基因在胚胎发育早期的表达 | 第87-103页 |
| ·前言 | 第87-90页 |
| ·材料与方法 | 第90-95页 |
| ·实验材料 | 第90页 |
| ·金鱼自交二倍体和雌核发育单倍体胚胎的获得 | 第90-91页 |
| ·金鱼kaiso capped mRNA的制备 | 第91-92页 |
| ·金鱼kaiso MO的合成 | 第92页 |
| ·构建金鱼ntl启动子控制的GFP报告基因载体 | 第92-93页 |
| ·CpG甲基转移酶(M.SssI)处理pN-1252GFP | 第93页 |
| ·HapⅡ和MspⅠ单酶切 | 第93-94页 |
| ·原位杂交 | 第94页 |
| ·实时定量PCR | 第94-95页 |
| ·实验结果 | 第95-101页 |
| ·雌核发育单倍体和自交二倍体胚胎中ntl表达的差异分析 | 第95-97页 |
| ·ntl启动子的卵源甲基化修饰对胚胎发育早期ntl表达的影响 | 第97-99页 |
| ·甲基化和非甲基化ntl启动子所控制的GFP报告基因的表达 | 第99-101页 |
| ·小结与讨论 | 第101-102页 |
| ·进一步实验设想 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 作者简历 | 第117页 |
