| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 开花调控途径研究 | 第10-12页 |
| 1.1.1 光周期途径 | 第10页 |
| 1.1.2 春化途径 | 第10-11页 |
| 1.1.3 赤霉素途径 | 第11-12页 |
| 1.1.4 自主途径 | 第12页 |
| 1.2 花发育的分子生物学研究 | 第12-14页 |
| 1.2.1 成花诱导调控基因的研究 | 第12-13页 |
| 1.2.2 开花整合子基因研究 | 第13页 |
| 1.2.3 MADS-box转录因子研究 | 第13-14页 |
| 1.3 SVP类MADS-box基因在花发育调控中的研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 SVP类MADS-box基因对花发育的调控机制 | 第14-15页 |
| 1.3.2 SVP类MADS-box基因的克隆分析 | 第15-16页 |
| 1.3.3 影响SVP基因表达的因素 | 第16页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第16-18页 |
| 2 低温贮藏期间MADS-box家族花芽发育基因的筛选 | 第18-24页 |
| 2.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 低温储藏期间细叶百合鳞茎花芽分化过程形态观察 | 第18页 |
| 2.2.2 转录组测序文库中MADS-box转录因子筛选 | 第18-19页 |
| 2.2.3 荧光定量分析LpSVP基因低温贮藏不同时期相对表达水平 | 第19-21页 |
| 2.2.4 结果与分析 | 第21-23页 |
| 2.2.5 本章小结 | 第23-24页 |
| 3 LpSVP基因的克隆及其生物信息学分析 | 第24-34页 |
| 3.1 试验材料 | 第24页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 3.1.2 菌株及主要试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 相关培养基及抗生素贮存液的配制 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-27页 |
| 3.2.1 细叶百合总RNA的提取 | 第24页 |
| 3.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第24-25页 |
| 3.2.3 目的片段扩增反应 | 第25页 |
| 3.2.4 目的片段胶回收 | 第25-26页 |
| 3.2.5 胶回收产物与pMD18-T载体连接 | 第26页 |
| 3.2.6 连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第26页 |
| 3.2.7 质粒提取 | 第26-27页 |
| 3.3 结果与分析 | 第27-33页 |
| 3.3.1 目的片段的PCR扩增 | 第27页 |
| 3.3.2 目的条带胶回收 | 第27-28页 |
| 3.3.3 菌落PCR鉴定 | 第28页 |
| 3.3.4 细叶百合LpSVP序列分析 | 第28-29页 |
| 3.3.5 细叶百合LpSVP氨基酸多序列比对及系统进化分析 | 第29-31页 |
| 3.3.6 细叶百合LpSVP保守结构域分析 | 第31页 |
| 3.3.7 细叶百合LpSVP蛋白特性分析 | 第31-33页 |
| 3.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 4 LpSVP时空表达特性分析 | 第34-38页 |
| 4.1 试验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 不同植物组织总RNA的提取 | 第34页 |
| 4.2.2 反转录引物设计与合成 | 第34页 |
| 4.2.3 反转录反应 | 第34页 |
| 4.2.4 RT-PCR反应 | 第34-35页 |
| 4.2.5 qRT-PCR反应 | 第35页 |
| 4.2.6 凝胶电泳分析基因在不同组织中表达 | 第35页 |
| 4.2.7 2-△△Ct方法计算基因在不同花发育时期的相对表达量 | 第35页 |
| 4.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 4.3.1 LpSVP基因不同组织表达分析 | 第35-36页 |
| 4.3.2 LpSVP基因花发育不同时期表达分析 | 第36-37页 |
| 4.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 5 农杆菌介导的LpSVP基因转化烟草 | 第38-47页 |
| 5.1 试验材料及试剂 | 第38-39页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 5.1.2 菌株及主要试剂 | 第38页 |
| 5.1.3 相关培养基和抗生素溶液配制 | 第38-39页 |
| 5.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 5.2.1 中间表达载体的构建 | 第39页 |
| 5.2.2 植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 5.2.3 植物表达载体转化农杆菌 | 第40页 |
| 5.2.4 叶盘法转化烟草 | 第40-41页 |
| 5.2.5 抗性植株的分子水平鉴定 | 第41-42页 |
| 5.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 5.3.1 中间表达载体的构建 | 第42页 |
| 5.3.2 植物表达载体构建 | 第42-43页 |
| 5.3.3 农杆菌重组质粒的PCR鉴定 | 第43页 |
| 5.3.4 转基因烟草外植体分化观察 | 第43-44页 |
| 5.3.5 转基因烟草分子水平检测 | 第44-45页 |
| 5.3.6 转基因烟草表型观察 | 第45-46页 |
| 5.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 6 讨论 | 第47-49页 |
| 6.1 花芽形态分化与基因差异表达之间的关系 | 第47页 |
| 6.2 LpSVP基因时空表达特性分析 | 第47-48页 |
| 6.3 LpSVP基因对烟草遗传转化分析 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
