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细叶百合LpSVP基因的克隆及其对烟草的遗传转化

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
1 绪论第10-18页
    1.1 开花调控途径研究第10-12页
        1.1.1 光周期途径第10页
        1.1.2 春化途径第10-11页
        1.1.3 赤霉素途径第11-12页
        1.1.4 自主途径第12页
    1.2 花发育的分子生物学研究第12-14页
        1.2.1 成花诱导调控基因的研究第12-13页
        1.2.2 开花整合子基因研究第13页
        1.2.3 MADS-box转录因子研究第13-14页
    1.3 SVP类MADS-box基因在花发育调控中的研究第14-16页
        1.3.1 SVP类MADS-box基因对花发育的调控机制第14-15页
        1.3.2 SVP类MADS-box基因的克隆分析第15-16页
        1.3.3 影响SVP基因表达的因素第16页
    1.4 研究的目的及意义第16-18页
2 低温贮藏期间MADS-box家族花芽发育基因的筛选第18-24页
    2.1 试验材料第18页
        2.1.1 植物材料第18页
        2.1.2 主要试剂第18页
    2.2 试验方法第18-24页
        2.2.1 低温储藏期间细叶百合鳞茎花芽分化过程形态观察第18页
        2.2.2 转录组测序文库中MADS-box转录因子筛选第18-19页
        2.2.3 荧光定量分析LpSVP基因低温贮藏不同时期相对表达水平第19-21页
        2.2.4 结果与分析第21-23页
        2.2.5 本章小结第23-24页
3 LpSVP基因的克隆及其生物信息学分析第24-34页
    3.1 试验材料第24页
        3.1.1 植物材料第24页
        3.1.2 菌株及主要试剂第24页
        3.1.3 相关培养基及抗生素贮存液的配制第24页
    3.2 试验方法第24-27页
        3.2.1 细叶百合总RNA的提取第24页
        3.2.2 cDNA第一条链的合成第24-25页
        3.2.3 目的片段扩增反应第25页
        3.2.4 目的片段胶回收第25-26页
        3.2.5 胶回收产物与pMD18-T载体连接第26页
        3.2.6 连接产物转化大肠杆菌DH5α第26页
        3.2.7 质粒提取第26-27页
    3.3 结果与分析第27-33页
        3.3.1 目的片段的PCR扩增第27页
        3.3.2 目的条带胶回收第27-28页
        3.3.3 菌落PCR鉴定第28页
        3.3.4 细叶百合LpSVP序列分析第28-29页
        3.3.5 细叶百合LpSVP氨基酸多序列比对及系统进化分析第29-31页
        3.3.6 细叶百合LpSVP保守结构域分析第31页
        3.3.7 细叶百合LpSVP蛋白特性分析第31-33页
    3.4 本章小结第33-34页
4 LpSVP时空表达特性分析第34-38页
    4.1 试验材料第34页
        4.1.1 植物材料第34页
        4.1.2 主要试剂第34页
    4.2 试验方法第34-35页
        4.2.1 不同植物组织总RNA的提取第34页
        4.2.2 反转录引物设计与合成第34页
        4.2.3 反转录反应第34页
        4.2.4 RT-PCR反应第34-35页
        4.2.5 qRT-PCR反应第35页
        4.2.6 凝胶电泳分析基因在不同组织中表达第35页
        4.2.7 2-△△Ct方法计算基因在不同花发育时期的相对表达量第35页
    4.3 结果与分析第35-37页
        4.3.1 LpSVP基因不同组织表达分析第35-36页
        4.3.2 LpSVP基因花发育不同时期表达分析第36-37页
    4.4 本章小结第37-38页
5 农杆菌介导的LpSVP基因转化烟草第38-47页
    5.1 试验材料及试剂第38-39页
        5.1.1 植物材料第38页
        5.1.2 菌株及主要试剂第38页
        5.1.3 相关培养基和抗生素溶液配制第38-39页
    5.2 试验方法第39-42页
        5.2.1 中间表达载体的构建第39页
        5.2.2 植物表达载体的构建第39-40页
        5.2.3 植物表达载体转化农杆菌第40页
        5.2.4 叶盘法转化烟草第40-41页
        5.2.5 抗性植株的分子水平鉴定第41-42页
    5.3 结果与分析第42-46页
        5.3.1 中间表达载体的构建第42页
        5.3.2 植物表达载体构建第42-43页
        5.3.3 农杆菌重组质粒的PCR鉴定第43页
        5.3.4 转基因烟草外植体分化观察第43-44页
        5.3.5 转基因烟草分子水平检测第44-45页
        5.3.6 转基因烟草表型观察第45-46页
    5.4 本章小结第46-47页
6 讨论第47-49页
    6.1 花芽形态分化与基因差异表达之间的关系第47页
    6.2 LpSVP基因时空表达特性分析第47-48页
    6.3 LpSVP基因对烟草遗传转化分析第48-49页
结论第49-50页
参考文献第50-59页
攻读学位期间发表的学术论文第59-60页
致谢第60-61页

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