| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.1 油菜的重要性 | 第9页 |
| 1.2 基因编辑技术发展历程 | 第9-19页 |
| 1.2.1 锌指核酸酶(ZFN) | 第11-12页 |
| 1.2.2 类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN) | 第12-13页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas技术 | 第13-19页 |
| 1.3 本课题目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第20-21页 |
| 2.1.3 常用分子生物学试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.5 常用试剂的浓度和配置方法 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 确定目的基因及其序列 | 第23页 |
| 2.2.2 甘蓝型油菜双靶点CRISPR/Cas9载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.2.3 电击法转化农杆菌感受态GV3101 | 第27页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 转基因植株初步检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 转基因植株靶位点编辑情况检测 | 第29-31页 |
| 3 结果和分析 | 第31-53页 |
| 3.1 目的基因sgRNAs选择 | 第31-33页 |
| 3.2 获得油菜转基因植株 | 第33-35页 |
| 3.3 转基因材料初步鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 CRISPR/Cas9靶向单基因的编辑效率 | 第36-37页 |
| 3.5 甘蓝型油菜中靶向多基因的CRISPR/Cas9编辑效率 | 第37-41页 |
| 3.6 T0代转基因突变体的基因型 | 第41-44页 |
| 3.7 CRISPR/Cas9诱导的突变类型及频率 | 第44-45页 |
| 3.8 CRISPR/Cas9诱导的突变可以稳定遗传 | 第45-49页 |
| 3.9 CRISPR/Cas9在甘蓝型油菜中脱靶情况检测 | 第49-50页 |
| 3.10 CRISPR/Cas9诱导的突变体表型检测 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 影响油菜转化效率的因素 | 第53页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9在甘蓝型油菜中有较高的编辑效率 | 第53-54页 |
| 4.3 Cas9和sgRNA影响基因组编辑效率 | 第54-55页 |
| 4.4 CRISPR/Cas9在甘蓝型油菜中脱靶概率较低 | 第55页 |
| 4.5 CRISPR/Cas9诱导产生潜在的不含T-DNA的突变体 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
