| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 油菜杂种优势的利用 | 第11-12页 |
| 1.1.1 油菜细胞质不育 | 第11-12页 |
| 1.1.2 油菜细胞核雄性不育 | 第12页 |
| 1.2 油菜隐性细胞核雄性不育研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 两对隐性基因控制的细胞核雄性不育 | 第12-13页 |
| 1.2.2 隐性上位基因互作细胞核雄性不育 | 第13-15页 |
| 1.3 细胞核不育系 7365AB研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.1 雄性核不育 7365A的不育机理研究 | 第15-16页 |
| 1.3.2 雄性核不育 7365AB恢复基因BnaMs3克隆和功能研究 | 第16-20页 |
| 1.3.2.1 恢复基因BnaMs3的克隆 | 第16-17页 |
| 1.3.2.2 恢复基因BnaMs3功能研究和进化分析 | 第17-20页 |
| 1.3.3 不育基因Bnams4~b的克隆和功能分析 | 第20-21页 |
| 1.3.4 BnaMs3恢复Bnams4~b育性作用机理研究 | 第21页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9技术在植物中应用 | 第21-23页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9技术概述 | 第21-22页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9在油菜基因组编辑中应用 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第25页 |
| 2.2 遗传转化载体的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.1 定点突变载体构建 | 第25-28页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9载体构建 | 第28-29页 |
| 2.3 拟南芥的遗传转化 | 第29-30页 |
| 2.4 DNA的提取 | 第30页 |
| 2.5 转基因植株的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.6 醋酸洋红染色观察 | 第31页 |
| 2.7 CRISPR后代编辑检测 | 第31页 |
| 2.8 RNA提取和反转录 | 第31-32页 |
| 2.9 Real time-PCR | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-43页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9技术编辑A41基因 | 第33-37页 |
| 3.1.1 CRISPR/Cas9表达载体构建 | 第33页 |
| 3.1.2 CRISPR/Cas9表达载体遗传转化及后代编辑检测 | 第33-35页 |
| 3.1.3 在BnaMs3与Bnams4~b背景下的A41基因编辑 | 第35-37页 |
| 3.2 BnaMs3功能变异氨基酸位点探究 | 第37-43页 |
| 3.2.1 BnaMs3定点突变载体构建 | 第37-38页 |
| 3.2.2 定点突变表达载体遗传转化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 点突变BnaMs3恢复Bnams4~b育性观察 | 第39-41页 |
| 3.2.4 点突变BnaMs3与Bnams4~b杂交拟南芥转录表达量检测 | 第41-42页 |
| 3.2.5 点突变Bnams3的补充验证 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 BnaMs3作用机理初步探究 | 第43页 |
| 4.2 BnaMs3与Bnams4~b并不是在蛋白水平上的互作 | 第43-44页 |
| 4.3 功能氨基酸的突变导致BnaMs3失去恢复功能 | 第44页 |
| 4.4 BnaMs3功能结构域TPR功能分析 | 第44-45页 |
| 4.5 BnaMs3在转录水平上调控Bnams4~b的表达 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
