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莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)脂肪酸转运蛋白FAX(fatty acid export)的鉴定与功能分析

摘要第8-11页
Abstract第11-14页
主要符号对照表第15-16页
第1章 绪论第16-28页
    1.1 叶绿体内油脂活动第16-21页
        1.1.1 酰基-ACP合成过程第16-17页
        1.1.2 游离脂肪酸的合成及转运第17-18页
        1.1.3 类囊体膜脂的合成和降解第18-21页
    1.2 内质网内油脂活动第21-22页
        1.2.1 脂酰-CoA进入内质网过程第21页
        1.2.2 TAG合成过程第21-22页
    1.3 过氧化物酶体中油脂活动第22-26页
        1.3.1 TAG分解过程第23页
        1.3.2 脂肪酸进入过氧化物酶体过程第23-24页
        1.3.3 β-氧化过程第24-26页
    1.4 研究内容与意义第26-28页
        1.4.1 研究内容第26页
        1.4.2 研究意义第26-28页
第2章 实验材料与方法第28-42页
    2.1 实验材料与仪器第28-29页
        2.1.1 藻种来源及培养条件第28页
        2.1.2 实验试剂第28页
        2.1.3 实验使用的仪器第28页
        2.1.4 培养基及相关试剂的配制第28-29页
    2.2 实验方法第29-42页
        2.2.1 提取莱茵衣藻UVM4的RNA第29页
        2.2.2 RNA反转为cDNA第29-30页
        2.2.3 过表达载体的构建第30-33页
        2.2.4 过表达载体转化莱茵衣藻及转化子筛选第33-34页
        2.2.5 采用PCR扩增方法对突变体进行筛选第34-35页
        2.2.6 莱茵衣藻转化子的生长状况第35-36页
        2.2.7 莱茵衣藻转化子荧光定量检测第36页
        2.2.8 莱茵衣藻转化子经尼罗红染色后荧光强度的测定第36-37页
        2.2.9 莱茵衣藻转化子叶绿素-a含量的测定第37-38页
        2.2.10 莱茵衣藻转化子总脂的提取第38页
        2.2.11 莱茵衣藻转化子脂肪酸甲酯化与气相色谱分析第38-39页
        2.2.12 对CrFAX基因进行酵母功能验证第39页
        2.2.13 转录组分析差异表达基因,并进行荧光定量PCR验证第39-42页
第3章 研究结果与分析第42-72页
    3.1 莱茵衣藻FAX基因的生物信息学分析第42-49页
        3.1.1 对多物种的FAX基因进行序列分析第42-46页
        3.1.2 CrFAX基因外显子分析第46-47页
        3.1.3 CrFAX蛋白序列分析第47页
        3.1.4 CrFAX空间结构分析第47-48页
        3.1.5 CrFAX亚细胞定位分析第48-49页
    3.2 莱茵衣藻FAX过表达载体构建第49-50页
        3.2.1 莱茵衣藻FAX基因扩增结果第49页
        3.2.2 测序结果分析第49-50页
        3.2.3 构建莱茵衣藻过表达载体第50页
    3.3 获得CrFAX过量表达莱茵衣藻第50-51页
        3.3.1 过表达载体转化莱茵衣藻第50页
        3.3.2 莱茵衣藻转化子筛选第50-51页
        3.3.3 转录水平(Realtime PCR)检测第51页
    3.4 莱茵衣藻转化子生长状况分析第51-54页
        3.4.1 细胞数与OD_(680)的线性关系第52页
        3.4.2 生长曲线绘制第52-53页
        3.4.3 FAX基因过表达莱茵衣藻的叶绿素-a含量分析第53-54页
    3.5 FAX基因过表达莱茵衣藻的脂质累积情况分析第54-59页
        3.5.1 尼罗红荧光染色法快速测定细胞内中性脂含量第54-56页
        3.5.2 FAX基因过表达莱茵衣藻的总脂含量第56-57页
        3.5.3 FAX基因过表达莱茵衣藻的脂肪酸组成分析第57-59页
    3.6 FAX过表达莱茵衣藻的转录组学分析及验证第59-66页
        3.6.1 样品RNA质量检测结果第59页
        3.6.2 测序数据量统计第59-60页
        3.6.3 数据比对与质控第60页
        3.6.4 差异基因分析(Noiseq方法)第60-61页
        3.6.5 差异表达基因的GO功能显著性富集分析第61-63页
        3.6.6 差异基因Pathway显著性分析第63-65页
        3.6.7 差异表达基因CrACS1和CrACS2的荧光定量PCR验证第65-66页
    3.7 酵母中验证莱茵衣藻FAX功能第66页
    3.8 在外加碳源条件下,FAX基因过表达莱茵衣藻脂质累积情况分析第66-72页
        3.8.1 在外加3gL~(-1)CH_3COONa时,莱茵衣藻转化子的脂质累积情况分析第66-68页
        3.8.2 在外加6gL~(-1)Glucose时,莱茵衣藻转化子的脂质累积情况分析第68-72页
第4章 结论与展望第72-75页
    4.1 讨论与结论第72-74页
        4.1.1 讨论第72-74页
        4.1.2 结论第74页
    4.2 展望第74-75页
参考文献第75-84页
致谢第84-86页
在学期间所发表的论文第86页

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