| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-38页 |
| 1.1 蛋白质的脂链修饰 | 第16-17页 |
| 1.2 蛋白质棕榈酰化修饰的功能 | 第17-19页 |
| 1.2.1 蛋白质棕榈酰化辅助可溶性蛋白靶向生物膜 | 第17-18页 |
| 1.2.2 蛋白质棕榈酰化调控蛋白的脂筏定位 | 第18页 |
| 1.2.3 蛋白质棕榈酰化调控蛋白的活性 | 第18页 |
| 1.2.4 蛋白质棕榈酰化辅助蛋白形成复合体 | 第18-19页 |
| 1.2.5 蛋白质棕榈酰化调控蛋白的稳定性 | 第19页 |
| 1.2.6 蛋白质棕榈酰化调整蛋白的跨膜区构象 | 第19页 |
| 1.3 棕榈酰转移酶 | 第19-30页 |
| 1.3.1 棕榈酰转移酶的结构 | 第20页 |
| 1.3.2 棕榈酰转移酶的催化机制 | 第20-21页 |
| 1.3.3 真核生物中棕榈酰转移酶的功能及底物研究 | 第21-27页 |
| 1.3.3.1 哺乳动物中的棕榈酰转移酶 | 第21-22页 |
| 1.3.3.2 酵母中的棕榈酰转移酶 | 第22-23页 |
| 1.3.3.3 植物中的棕榈酰转移酶 | 第23-24页 |
| 1.3.3.4 植物中棕榈酰转移酶的底物研究 | 第24-27页 |
| 1.3.4 去棕榈酰化修饰 | 第27页 |
| 1.3.5 植物中研究棕榈酰转移酶的常用方法 | 第27-30页 |
| 1.3.5.1 研究棕榈酰转移酶功能的方法 | 第27-28页 |
| 1.3.5.2 寻找棕榈酰转移酶底物的方法 | 第28-29页 |
| 1.3.5.3 化学药剂的使用 | 第29-30页 |
| 1.4 植物根毛生长 | 第30-33页 |
| 1.4.1 根毛的发生 | 第30-31页 |
| 1.4.2 小G蛋白ROP调控根毛的生长 | 第31-33页 |
| 1.5 植物的双受精过程 | 第33-37页 |
| 1.5.1 花粉管生长过程中的信号分子 | 第33-36页 |
| 1.5.1.1 细胞外多肽和类受体激酶 | 第33-34页 |
| 1.5.1.2 离子的稳态 | 第34-36页 |
| 1.5.2 花粉管胚珠导向过程中的信号分子 | 第36-37页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-63页 |
| 2.1 材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 植物材料及生长条件 | 第38-39页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第39页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第39页 |
| 2.2 方法 | 第39-63页 |
| 2.2.1 突变体的鉴定 | 第39-43页 |
| 2.2.1.1 突变体的选择和订购 | 第39页 |
| 2.2.1.2 突变体鉴定引物的设计 | 第39-40页 |
| 2.2.1.3 植物基因组DNA提取(小量法) | 第40-41页 |
| 2.2.1.4 突变体基因组水平的鉴定 | 第41页 |
| 2.2.1.5 植物总RNA的提取(试剂盒法) | 第41-43页 |
| 2.2.1.6 反转录 | 第43页 |
| 2.2.1.7 突变体RNA水平的鉴定 | 第43页 |
| 2.2.2 CRISPR-Cas9敲除构建突变体 | 第43-45页 |
| 2.2.3 表达载体的构建 | 第45-51页 |
| 2.2.3.1 PCR引物设计 | 第45-46页 |
| 2.2.3.2 目的片段的克隆 | 第46-47页 |
| 2.2.3.3 PCR产物回收(试剂盒法) | 第47页 |
| 2.2.3.4 TOPO连接反应 | 第47页 |
| 2.2.3.5 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第47-49页 |
| 2.2.3.6 DNA序列的测定 | 第49页 |
| 2.2.3.7 质粒的提取(试剂盒法) | 第49-50页 |
| 2.2.3.8 LR反应 | 第50页 |
| 2.2.3.9 质粒DNA的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的拟南芥遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第51-53页 |
| 2.2.4.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第51页 |
| 2.2.4.2 拟南芥的栽培和转化 | 第51-52页 |
| 2.2.4.3 拟南芥转基因植株的筛选和鉴定 | 第52-53页 |
| 2.2.5 GUS染色和照相 | 第53-54页 |
| 2.2.6 根毛表型的观察与量化 | 第54页 |
| 2.2.7 蛋白的提取与膜蛋白分离 | 第54-57页 |
| 2.2.8 考马斯亮蓝染色 | 第57页 |
| 2.2.9 拟南芥花粉表型分析 | 第57-60页 |
| 2.2.9.1 亚历山大染色 | 第57-58页 |
| 2.2.9.2 DAPI染色 | 第58页 |
| 2.2.9.3 扫描电子显微镜观察花粉 | 第58页 |
| 2.2.9.4 花粉体外萌发 | 第58-59页 |
| 2.2.9.5 花粉管苯胺蓝染色 | 第59-60页 |
| 2.2.10 激光共聚焦显微镜观察及图像处理 | 第60页 |
| 2.2.11 光学切片 | 第60-61页 |
| 2.2.12 药剂处理及荧光染料染色 | 第61-63页 |
| 2.2.12.1 FM4-64染色 | 第61页 |
| 2.2.12.2 BFA处理 | 第61页 |
| 2.2.12.3 LatB处理 | 第61-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-90页 |
| 3.1 PAT4调控根毛的生长 | 第63-75页 |
| 3.1.1 PAT4在根毛中高量表达 | 第63-64页 |
| 3.1.2 PAT4调控根毛的生长 | 第64-66页 |
| 3.1.3 PAT4定位于细胞膜上 | 第66-68页 |
| 3.1.4 PAT4参与调控ROP2在根毛质膜上的定位 | 第68-70页 |
| 3.1.5 PAT4参与调控ROP下游的细胞活动 | 第70-72页 |
| 3.1.6 PAT4与SCN1共同调控根毛的生长 | 第72-74页 |
| 3.1.7 PAT4与TIP1协同调控根毛的极性生长 | 第74-75页 |
| 3.2 PAT1、2、3、4、8共同调控花粉管的接纳 | 第75-90页 |
| 3.2.1 PAT1、2、3、4、8(简称为PENTAPAT)在花粉中高量表达 | 第75-77页 |
| 3.2.2 PENTAPAT定位于花粉管细胞膜上 | 第77-78页 |
| 3.2.3 PENTAPAT蛋白具有高度相似性 | 第78页 |
| 3.2.4 PENTAPAT高阶突变体的构建 | 第78-79页 |
| 3.2.5 PENTAPAT参与调控植物的育性 | 第79-80页 |
| 3.2.6 PENTAPAT在雄配子体中发挥功能 | 第80-81页 |
| 3.2.7 PENTAPAT突变不影响植物生长和花粉发育 | 第81-82页 |
| 3.2.8 PENTAPAT突变体花粉管体外生长异常 | 第82-84页 |
| 3.2.9 PENTAPAT突变体花粉管体内生长和导向正常 | 第84-86页 |
| 3.2.10 PENTAPAT参与调控植物的双受精过程 | 第86-88页 |
| 3.2.11 PENTAPAT负责调控花粉管的接纳和破裂 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 4.1 拟南芥PAT4通过调控ROP2的质膜定位介导根毛的生长 | 第90页 |
| 4.2 GDI1/SCN1与PAT4共同调控根毛的生长 | 第90-91页 |
| 4.3 PENTAPAT共同调控花粉管的接纳 | 第91-92页 |
| 4.4 PENTAPAT的底物 | 第92-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第111页 |
