| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 肿瘤干细胞 | 第14-17页 |
| 1.1.1 肿瘤干细胞理论 | 第14页 |
| 1.1.2 肿瘤干细胞生物学特点 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肿瘤干细胞分离及鉴定 | 第15-17页 |
| 1.2 自噬 | 第17-20页 |
| 1.2.1 自噬理论 | 第17页 |
| 1.2.2 自噬的主要途径 | 第17-18页 |
| 1.2.3 自噬的生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.2.4 自噬与肿瘤 | 第19页 |
| 1.2.5 肿瘤细胞自噬与抗原提呈 | 第19-20页 |
| 1.3 肿瘤干细胞与肿瘤免疫治疗 | 第20-22页 |
| 1.3.1 非特异性免疫治疗 | 第20-21页 |
| 1.3.2 过继性免疫细胞疗法 | 第21页 |
| 1.3.3 肿瘤疫苗 | 第21页 |
| 1.3.4 单克隆抗体 | 第21-22页 |
| 1.4 树突状细胞 | 第22-25页 |
| 1.4.1 树突状细胞的生物学特点 | 第22-23页 |
| 1.4.2 树突状细胞与T细胞应答 | 第23页 |
| 1.4.3 树突状细胞疫苗与肿瘤免疫 | 第23-25页 |
| 1.5 立题依据 | 第25-27页 |
| 第2章 材料与试剂 | 第27-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第27页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第28-30页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第30-33页 |
| 2.2.1 磷酸盐缓冲液(PBS)的配置 | 第30页 |
| 2.2.2 0.25 %胰酶-EDTA混合液配制(10X) | 第30页 |
| 2.2.3 RPMI1640培养液配制 | 第30-31页 |
| 2.2.4 DMEM/F12培养基配制 | 第31页 |
| 2.2.5 磁珠分选所用Buffer的配制 | 第31-32页 |
| 2.2.6 磁珠分选用DNaseI的配制 | 第32页 |
| 2.2.7 提取Dribbles的药物配制 | 第32-33页 |
| 第3章 实验方法 | 第33-45页 |
| 3.1 小鼠结肠癌细胞的培养 | 第33-34页 |
| 3.1.1 CT-26细胞培养 | 第33页 |
| 3.1.2 CT-26细胞传代 | 第33页 |
| 3.1.3 CT-26细胞冻存 | 第33页 |
| 3.1.4 CT-26细胞复苏 | 第33-34页 |
| 3.2 小鼠结肠癌干细胞的分离、培养及鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.1 免疫磁珠法分选小鼠结肠癌干细胞 | 第34-35页 |
| 3.2.2 小鼠结肠癌干细胞的培养 | 第35-36页 |
| 3.2.3 小鼠结肠癌干细胞的鉴定 | 第36页 |
| 3.3 小鼠髓源树突状细胞的分离培养及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.1 小鼠髓源树突状细胞的分离培养 | 第36-37页 |
| 3.3.2 小鼠髓源树突状细胞的鉴定 | 第37页 |
| 3.4 DRibbles提取和鉴定 | 第37-40页 |
| 3.4.1 CT-26肿瘤细胞不同自噬诱导时间的总蛋白的提取 | 第37-38页 |
| 3.4.2 CD44~+CT-26肿瘤干细胞不同自噬诱导时间的总蛋白的提取 | 第38页 |
| 3.4.3 免疫印迹法检测细胞的自噬水平 | 第38-39页 |
| 3.4.4 DRibbles的诱导分离 | 第39-40页 |
| 3.4.5 DRibbles超微结构的透射电镜观察 | 第40页 |
| 3.5 细胞冻融裂解物的制备 | 第40页 |
| 3.6 CCK-8法检测DRibbles对淋巴细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
| 3.7 树突状细胞疫苗制备 | 第41-42页 |
| 3.7.1 不同抗原负载树突状细胞疫苗的制备 | 第41-42页 |
| 3.7.2 树突状细胞疫苗的抗原提呈能力检测 | 第42页 |
| 3.8 树突状细胞疫苗对结肠癌的治疗作用 | 第42-44页 |
| 3.8.1 小鼠结肠癌模型的建立 | 第42页 |
| 3.8.2 小鼠疫苗治疗 | 第42-43页 |
| 3.8.3 小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第43页 |
| 3.8.4 细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用的检测 | 第43-44页 |
| 3.8.5 流式细胞术检测分泌IFN-γ的T淋巴细胞的比例 | 第44页 |
| 3.8.6 小鼠瘤重测量 | 第44页 |
| 3.9 统计学分析 | 第44-45页 |
| 第4章 实验结果 | 第45-62页 |
| 4.1 小鼠结肠癌干细胞的分离、培养 | 第45-46页 |
| 4.1.1 CD44~+CT-26细胞的分离 | 第45页 |
| 4.1.2 CD44~+CT-26细胞的培养 | 第45-46页 |
| 4.2 CD44~+CT-26细胞的鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.1 诱导分化实验 | 第46页 |
| 4.2.2 流式细胞术检测细胞表面标志物 | 第46-47页 |
| 4.2.3 单细胞克隆形成实验 | 第47页 |
| 4.3 小鼠髓源树突状细胞的分离、培养及鉴定 | 第47-49页 |
| 4.3.1 小鼠髓源DC的分离、培养 | 第47-48页 |
| 4.3.2 小鼠髓源DC的表面标志物鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4 DRibbles提取和鉴定 | 第49-51页 |
| 4.4.1 小鼠CT-26肿瘤细胞诱导自噬不同时间的LC3-II蛋白表达 | 第49页 |
| 4.4.2 小鼠CD44~+CT-26肿瘤干细胞诱导自噬不同时间的LC3-II蛋白表达 | 第49-50页 |
| 4.4.3 CT-26肿瘤细胞自噬来源的DRibbles超微结构的透射电镜观察 | 第50-51页 |
| 4.4.4 CD44~+CT-26肿瘤干细胞自噬来源的DRibbles超微结构的透射电镜观察 | 第51页 |
| 4.5 DRibbles对淋巴细胞增殖的影响 | 第51-53页 |
| 4.5.1 不同浓度的CT-26肿瘤细胞来源的DRibbles对淋巴细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 4.5.2 CT-26肿瘤细胞和CD44~+CT-26肿瘤干细胞来源的DRibbles和lysate对淋巴细胞增殖的影响 | 第52-53页 |
| 4.6 不同抗原负载树突状细胞表面分子表达的测定 | 第53-54页 |
| 4.7 小鼠结肠癌疫苗治疗实验 | 第54-62页 |
| 4.7.1 不同治疗组的小鼠T淋巴细胞对CT-26肿瘤细胞的杀伤效果 | 第54-57页 |
| 4.7.2 小鼠肿瘤生长曲线 | 第57-59页 |
| 4.7.3 小鼠肿瘤重量 | 第59-60页 |
| 4.7.4 小鼠生存曲线 | 第60页 |
| 4.7.5 小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ细胞所占比例 | 第60-62页 |
| 第5章 讨论 | 第62-65页 |
| 第6章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 作者简介及攻读学位期间发表的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
