| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 课题背景及研究目的和意义 | 第10-11页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.1.2 研究目的和意义 | 第10-11页 |
| 1.2 抗菌肽及其概述 | 第11-13页 |
| 1.2.1 抗菌肽分类和特点 | 第11页 |
| 1.2.2 抗菌肽的结构基因 | 第11-12页 |
| 1.2.3 抗菌肽抑菌机制概述 | 第12-13页 |
| 1.3 抗菌肽异源表达概述 | 第13-16页 |
| 1.3.1 抗菌肽异源表达宿主选择的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 抗菌肽异源表达包涵体的研究 | 第15页 |
| 1.3.3 抗菌肽异源表达及发酵条件优化的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 抗菌肽的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 1.5.1 克隆乳酸菌抗菌肽的基因序列 | 第17页 |
| 1.5.2 基因工程菌株的构建 | 第17页 |
| 1.5.3 大肠杆菌发酵条件的优化 | 第17-18页 |
| 1.6 技术路线 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第19-25页 |
| 2.1.1 实验所用质粒及菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 实验所用培养基 | 第19-21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第23-25页 |
| 2.2 乳酸菌抗菌肽基因的克隆 | 第25-28页 |
| 2.2.1 目的菌株基因组DNA的提取及其验证 | 第25-26页 |
| 2.2.2 PCR扩增抗菌肽基因引物的筛选及条件优化 | 第26-28页 |
| 2.2.3 目的条带的回收 | 第28页 |
| 2.3 基因工程菌株的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.1 plg与T载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.3.2 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第29页 |
| 2.3.3 puc-plg的转化 | 第29页 |
| 2.3.4 puc-plg转化的验证 | 第29-30页 |
| 2.4 重组抗菌肽在大肠杆菌中的表达 | 第30-33页 |
| 2.4.1 p Cold的双酶切 | 第30页 |
| 2.4.2 质粒PCR验证 | 第30页 |
| 2.4.3 plg与p Cold的连接 | 第30-31页 |
| 2.4.4 诱导表达 | 第31页 |
| 2.4.5 诱导表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.6 包涵体的复性 | 第32页 |
| 2.4.7 诱导表达的验证 | 第32-33页 |
| 2.5 优化大肠杆菌的发酵条件 | 第33-34页 |
| 2.5.1 发酵条件优化的单因素试验 | 第33-34页 |
| 2.5.2 中心组合试验 | 第34页 |
| 2.6 验证试验 | 第34-35页 |
| 第3章 抗菌肽基因特异引物的筛选及基因克隆 | 第35-46页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 植物乳杆菌基因组DNA提取及验证 | 第35-36页 |
| 3.3 第一阶段PCR扩增抗菌肽基因的引物筛选及反应条件优化 | 第36-38页 |
| 3.3.1 PCR引物筛选及反应条件优化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 PCR结果分析 | 第37-38页 |
| 3.4 第二阶段PCR扩增抗菌肽基因的引物筛选及反应条件优化 | 第38-39页 |
| 3.4.1 PCR引物筛选及反应条件优化 | 第38-39页 |
| 3.4.2 PCR结果分析 | 第39页 |
| 3.5 第三阶段PCR扩增抗菌肽基因的引物筛选及反应条件优化 | 第39-43页 |
| 3.5.1 PCR引物筛选及反应条件优化 | 第39-41页 |
| 3.5.2 PCR结果分析 | 第41-43页 |
| 3.6 第四阶段PCR扩增抗菌肽基因的引物筛选及反应条件优化 | 第43-45页 |
| 3.6.1 PCR引物筛选及反应条件优化 | 第43-44页 |
| 3.6.2 PCR结果分析 | 第44-45页 |
| 3.7 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 基因工程菌株的构建 | 第46-53页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 plg基因的克隆 | 第46-47页 |
| 4.3 E. coli- p Cold -plg的构建 | 第47-49页 |
| 4.3.1 plg与表达载体的连接及验证 | 第47-48页 |
| 4.3.2 连接产物的诱导表达 | 第48-49页 |
| 4.4 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第49-52页 |
| 4.4.1 诱导菌体起始浓度的优化 | 第49-50页 |
| 4.4.2 诱导剂IPTG浓度的优化 | 第50-51页 |
| 4.4.3 诱导温度的优化 | 第51-52页 |
| 4.4.4 诱导时间的优化 | 第52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 大肠杆菌发酵条件的优化 | 第53-66页 |
| 5.1 前言 | 第53页 |
| 5.2 最适培养基的确定 | 第53-54页 |
| 5.3 培养基成分的优化 | 第54-59页 |
| 5.3.1 最佳碳源的确定 | 第54-55页 |
| 5.3.2 最佳氮源的确定 | 第55-57页 |
| 5.3.3 金属离子的优化实验 | 第57-59页 |
| 5.4 发酵条件的单因素试验 | 第59-62页 |
| 5.4.1 发酵温度的单因素试验 | 第59-60页 |
| 5.4.2 发酵时间的单因素试验 | 第60-61页 |
| 5.4.3 培养基PH的单因素试验 | 第61-62页 |
| 5.5 响应面优化实验 | 第62-64页 |
| 5.6 验证实验 | 第64-65页 |
| 5.7 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
