| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 前言 | 第18-33页 |
| 第一章 广西壮族自治区PRRSV病原学检测 | 第33-62页 |
| 1.1 材料 | 第33-36页 |
| 1.1.1 细胞 | 第33页 |
| 1.1.2 病料采集 | 第33页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第34页 |
| 1.1.5 相关试剂配制 | 第34页 |
| 1.1.6 引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 1.1.7 分子生物学软件 | 第35-36页 |
| 1.2 实验方法 | 第36-44页 |
| 1.2.1 病料的采集与处理 | 第36页 |
| 1.2.2 组织样品总RNA提取 | 第36页 |
| 1.2.3 RNA反转录 | 第36-37页 |
| 1.2.4 PCR检测 | 第37-38页 |
| 1.2.5 PRRSVPCR扩增产物回收 | 第38-39页 |
| 1.2.6 pEASY-Bluntcloning载体的构建 | 第39-41页 |
| 1.2.7 PRRSV病毒的分离鉴定 | 第41-43页 |
| 1.2.8 PRRSV致病性分析 | 第43-44页 |
| 1.3 结果 | 第44-59页 |
| 1.3.1 PRRSVRT-PCR检测结果 | 第44-45页 |
| 1.3.2 PRRSV主要基因片段遗传进化分析及氨基酸序列比对 | 第45-52页 |
| 1.3.3 PRRSV分离鉴定 | 第52-54页 |
| 1.3.4 GXBB16-1致病性检测 | 第54-55页 |
| 1.3.5 GXBB16-1全基因序列分析 | 第55-59页 |
| 1.4 讨论 | 第59-61页 |
| 1.5 小结 | 第61-62页 |
| 第二章 广西壮族自治区PCV3病原学检测 | 第62-81页 |
| 2.1 材料 | 第62-64页 |
| 2.1.1 病料采集 | 第62-63页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 2.1.3 相关试剂配制 | 第63页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第63-64页 |
| 2.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 2.2.1 病料的采集和处理 | 第64页 |
| 2.2.2 组织样品中基因组DNA提取 | 第64-65页 |
| 2.2.3 PCR检测DNA样品中的PCV | 第65页 |
| 2.2.4 pMD18T载体的构建 | 第65页 |
| 2.2.5 pMD18T载体转化Trans5α感受态细胞 | 第65页 |
| 2.2.6 质粒PCR、酶切鉴定 | 第65页 |
| 2.2.7 RealtimePCR反应 | 第65-66页 |
| 2.2.8 PCV3荧光定量检测方法的建立 | 第66-67页 |
| 2.2.9 PCV3全基因序列扩增测序 | 第67页 |
| 2.2.10 PCV3全基因序列生物信息学分析 | 第67页 |
| 2.3 结果 | 第67-78页 |
| 2.3.1 PCV3荧光定量检测方法的建立 | 第67-73页 |
| 2.3.2 广西地区PCV3基因全长测序及遗传进化分析 | 第73-78页 |
| 2.4 讨论 | 第78-80页 |
| 2.5 小结 | 第80-81页 |
| 第三章 猪IFITM抗PRRSV作用研究 | 第81-103页 |
| 3.1 材料方法 | 第82-83页 |
| 3.1.1 毒株 | 第82页 |
| 3.1.2 质粒 | 第82页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第82页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第82页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第82-83页 |
| 3.1.6 引物设计与合成 | 第83页 |
| 3.2 实验方法 | 第83-90页 |
| 3.2.1 原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)的分离 | 第83-84页 |
| 3.2.2 猪原代外周血淋巴细胞(PBMC)的分离 | 第84页 |
| 3.2.3 接毒 | 第84-85页 |
| 3.2.4 接种PRRSV的PAM、PBMC细胞中IFITM基因表达变化 | 第85页 |
| 3.2.5 猪IFITM慢病毒包装 | 第85-86页 |
| 3.2.6 Marc145嘌呤霉素敏感性实验 | 第86页 |
| 3.2.7 慢病毒感染构建Marc145-IFITM稳定表达细胞系 | 第86页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR分析IFITM抑制PRRSV复制作用 | 第86-87页 |
| 3.2.9 间接免疫荧光分析IFITM抑制PRRSV复制作用 | 第87页 |
| 3.2.10 Westernblot分析IFITM抑制PRRSV复制作用 | 第87-89页 |
| 3.2.11 siRNA转染 | 第89-90页 |
| 3.3 结果 | 第90-101页 |
| 3.3.1 荧光定量PCR引物扩增产物的特异性判断 | 第90-91页 |
| 3.3.2 感染GXBB16-1后的PAM细胞IFITM基因转录水平显著上调 | 第91-92页 |
| 3.3.3 感染GXBB16-1后的PBMC细胞IFITM基因转录水平显著上调 | 第92-94页 |
| 3.3.4 猪IFITM分子氨基酸序列比对 | 第94页 |
| 3.3.5 Marc145细胞对嘌呤霉素敏感性检测 | 第94-95页 |
| 3.3.6 Marc145-IFITMs细胞系构建及鉴定 | 第95-96页 |
| 3.3.7 IFITM在Marc145细胞中稳定表达对PRRSV复制的影响 | 第96-98页 |
| 3.3.8 SiRNA干扰效率检测 | 第98-99页 |
| 3.3.9 敲低IFITM3的表达对病毒复制的影响 | 第99-101页 |
| 3.4 讨论 | 第101-102页 |
| 3.5 小结 | 第102-103页 |
| 第四章 结论与展望 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-115页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第115-117页 |
| 主要简历 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
