| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-43页 |
| 1.1 miRNAs概述 | 第18-19页 |
| 1.2 植物miRNAs研究进展 | 第19-33页 |
| 1.2.1 植物miRNAs的特点,产生及作用机制 | 第19-21页 |
| 1.2.2 植物miRNAs靶标基因的预测及验证 | 第21-24页 |
| 1.2.3 植物miRNAs与生长发育 | 第24-25页 |
| 1.2.4 植物miRNAs与抗逆反应 | 第25-30页 |
| 1.2.5 植物miRNAs的研究方法 | 第30-31页 |
| 1.2.6 麦类作物miRNAs研究进展 | 第31-33页 |
| 1.3 植物与病原物的互作机理 | 第33-37页 |
| 1.3.1 植物抗性基因 | 第33-34页 |
| 1.3.2 植物感病相关基因 | 第34-36页 |
| 1.3.3 植物与病原菌互作中的信号转导 | 第36-37页 |
| 1.4 小麦条锈病及小麦抗锈性 | 第37-40页 |
| 1.4.1 小麦条锈病的危害 | 第37页 |
| 1.4.2 小麦条锈菌的寄生专化型 | 第37-38页 |
| 1.4.3 小麦品种的抗锈性 | 第38-40页 |
| 1.5 小麦与条锈菌的互作研究进展 | 第40-42页 |
| 1.5.1 全生育期抗性小麦与条锈菌的互作机制 | 第40-41页 |
| 1.5.2 成株期抗性小麦与条锈菌的互作机制 | 第41-42页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第42-43页 |
| 第二章 具有成株抗锈性小麦品种不同生长时期与条锈菌互作中差异表达的miRNAs及其靶标基因的分离与鉴定 | 第43-73页 |
| 2.1 前言 | 第43-44页 |
| 2.2 材料、试剂及仪器 | 第44页 |
| 2.2.1 材料 | 第44页 |
| 2.2.2 仪器及试剂 | 第44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-51页 |
| 2.3.1 胁迫处理与样品采集 | 第44-45页 |
| 2.3.2 总RNA提取与纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.3 small RNA分离及建库测序 | 第46-47页 |
| 2.3.4 small RNA测序数据分析 | 第47-48页 |
| 2.3.5 降解组测序及数据分析 | 第48页 |
| 2.3.6 microarray分析 | 第48-50页 |
| 2.3.7 northern blot分析 | 第50页 |
| 2.3.8 cDNA合成及实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 2.4 结果与分析 | 第51-71页 |
| 2.4.1 small RNA测序结果概述 | 第51-54页 |
| 2.4.2 小麦已知miRNA的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4.3 小麦新的miRNA的鉴定 | 第55-57页 |
| 2.4.4 成株期兴资9104与CYR32互作过程中miRNA的表达情况分析 | 第57-59页 |
| 2.4.5 苗期兴资9104与CYR32互作过程中miRNA的表达情况分析 | 第59-62页 |
| 2.4.6 不同生长发育时期差异表达miRNA的鉴定 | 第62页 |
| 2.4.7 成株期小麦miRNA的靶标基因鉴定 | 第62-66页 |
| 2.4.8 苗期小麦miRNA的靶标基因鉴定 | 第66-70页 |
| 2.4.9 小麦miRNA靶标基因在不同时期的兴资9104应对条锈菌胁迫时的表达趋势分析 | 第70页 |
| 2.4.10 利用Pst基因组序列预测小麦miRNA的靶标基因 | 第70-71页 |
| 2.5 讨论与结论 | 第71-73页 |
| 第三章 PN-2013靶标TaMDHAR调控小麦成株期抗锈性 | 第73-105页 |
| 3.1 前言 | 第73-74页 |
| 3.2 材料、试剂及仪器 | 第74页 |
| 3.3 实验方法 | 第74-87页 |
| 3.3.1 胁迫处理与样品采集 | 第74页 |
| 3.3.2 DNA、RNA提取及cDNA合成 | 第74页 |
| 3.3.3 TaMDHAR基因的电子克隆与RT-PCR扩增 | 第74-78页 |
| 3.3.4 序列分析 | 第78-79页 |
| 3.3.5 实时荧光定量PCR | 第79-80页 |
| 3.3.6 利用共转化技术分析PN-2013和1136-P3对TaMDHAR的调控关系 | 第80-82页 |
| 3.3.7 BSMV-VIGS介导的基因沉默 | 第82-85页 |
| 3.3.8 植物组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力测定 | 第85-86页 |
| 3.3.9 植物组织中过氧化氢酶(CAT)的活性测定 | 第86页 |
| 3.3.10 植物组织中抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性测定 | 第86-87页 |
| 3.3.11 植物组织中单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定 | 第87页 |
| 3.3.12 植物组织中还原型抗坏血酸盐含量测定 | 第87页 |
| 3.4 结果与分析 | 第87-102页 |
| 3.4.1 1136-P3和PN-2013的结构分析 | 第87-88页 |
| 3.4.2 TaMDHAR的克隆及序列分析 | 第88-93页 |
| 3.4.3 miRNAs(1136-P3和PN-2013)均能够调控TaMDHAR的表达 | 第93-95页 |
| 3.4.4 在小麦与条锈菌互作中1136-P3、PN-2013与TaMDHAR的表达趋势 | 第95-96页 |
| 3.4.5 TaMDHAR沉默之后提高了小麦对条锈病的抗性 | 第96-102页 |
| 3.5 讨论与结论 | 第102-105页 |
| 第四章 PC-395靶标TaULP5增强兴资9104苗期感病性 | 第105-126页 |
| 4.1 前言 | 第105-106页 |
| 4.2 材料、试剂及仪器 | 第106页 |
| 4.3 实验方法 | 第106-111页 |
| 4.3.1 胁迫处理与样品采集 | 第106页 |
| 4.3.2 DNA、RNA提取及cDNA合成 | 第106页 |
| 4.3.3 TaULP5基因的电子克隆与RT-PCR扩增 | 第106-107页 |
| 4.3.4 序列分析 | 第107页 |
| 4.3.5 实时荧光定量PCR | 第107-108页 |
| 4.3.6 利用共转化技术分析PC-395对TaULP5的调控关系 | 第108页 |
| 4.3.7 TaULP5的亚细胞定位 | 第108-109页 |
| 4.3.8 酵母突变体互补分析 | 第109-110页 |
| 4.3.9 非生物胁迫条件下在酵母中TaULP5过表达分析 | 第110-111页 |
| 4.3.10 BSMV-VIGS介导的基因沉默 | 第111页 |
| 4.4 结果与分析 | 第111-123页 |
| 4.4.1 PC-395的结构分析 | 第111-112页 |
| 4.4.2 候选靶标基因的分离及序列分析 | 第112-114页 |
| 4.4.3 PC-395能够调控TaULP5的表达 | 第114-117页 |
| 4.4.4 TaULP5与PC-395在小麦与条锈菌互作中的表达趋势分析 | 第117页 |
| 4.4.5 酵母突变体中互补TaULP5能够部分恢复突变表型 | 第117-119页 |
| 4.4.6 TaULP5定位在细胞质中 | 第119页 |
| 4.4.7 酵母中过表达TaULP5提高了酵母抗非生物胁迫能力 | 第119-120页 |
| 4.4.8 TaULP5沉默之后提高了小麦对条锈病的抗性 | 第120-123页 |
| 4.5 讨论与结论 | 第123-126页 |
| 第五章 tae-miR164靶标TaNAC1/22正向调控小麦全生育期抗锈性 | 第126-147页 |
| 5.1 前言 | 第126页 |
| 5.2 材料、试剂及仪器 | 第126页 |
| 5.2.1 材料 | 第126页 |
| 5.2.2 仪器及试剂 | 第126页 |
| 5.3 实验方法 | 第126-131页 |
| 5.3.1 胁迫处理与样品采集 | 第126-127页 |
| 5.3.2 DNA、RNA提取及cDNA合成 | 第127页 |
| 5.3.3 TaNAC21/22基因的电子克隆与RT-PCR扩增 | 第127-129页 |
| 5.3.4 序列分析 | 第129页 |
| 5.3.5 利用烟草叶片对tae-miR164和靶标基因进行共转化研究 | 第129页 |
| 5.3.6 实时荧光定量PCR | 第129-130页 |
| 5.3.7 亚细胞定位分析 | 第130页 |
| 5.3.8 TaNAC21/22的转录激活功能分析 | 第130-131页 |
| 5.3.9 BSMV-VIGS介导的基因沉默 | 第131页 |
| 5.4 结果与分析 | 第131-144页 |
| 5.4.1 tae-miR164候选靶标基因的分离及序列分析 | 第131-137页 |
| 5.4.2 tae-miR164能够调控TaNAC21/22的表达 | 第137-139页 |
| 5.4.3 在小麦与条锈菌互作中tae-miR164与TaNAC21/22呈现了相异的表达趋势 | 第139页 |
| 5.4.4 TaNAC21/22定位在细胞核中 | 第139-140页 |
| 5.4.5 TaNAC21/22在酵母中展现了转录激活功能 | 第140-142页 |
| 5.4.6 TaNAC21/22沉默之后提高了小麦对条锈病的抗性 | 第142-144页 |
| 5.5 讨论与结论 | 第144-147页 |
| 第六章 tae-miR408抑制TaCLP1转录负调控小麦全生育期抗锈性 | 第147-165页 |
| 6.1 前言 | 第147-148页 |
| 6.2 材料、试剂及仪器 | 第148页 |
| 6.3 实验方法 | 第148-152页 |
| 6.3.1 胁迫处理与样品采集 | 第148页 |
| 6.3.2 DNA、RNA提取及cDNA合成 | 第148页 |
| 6.3.3 TaCLP1基因的电子克隆与RT-PCR扩增 | 第148-149页 |
| 6.3.4 序列分析 | 第149页 |
| 6.3.5 实时荧光定量PCR | 第149-150页 |
| 6.3.6 利用烟草叶片对tae-miR408和靶标基因进行共转化研究 | 第150页 |
| 6.3.7 高盐及铜离子胁迫条件下在酵母中TaCLP1过表达分析 | 第150-152页 |
| 6.3.8 BSMV-VIGS介导的基因沉默 | 第152页 |
| 6.4 结果与分析 | 第152-163页 |
| 6.4.1 tae-miR408候选靶标基因的分离及序列分析 | 第152-156页 |
| 6.4.2 tae-miR408能够调控TaCLP1的表达 | 第156-158页 |
| 6.4.3 在小麦与条锈菌互作中tae-miR408与TaCLP1呈现了相异的表达趋势 | 第158-159页 |
| 6.4.4 在酵母中过表达TaCLP1提高酵母耐高盐及铜离子胁迫的能力 | 第159-160页 |
| 6.4.5 TaCLP1沉默之后提高了小麦对条锈病的抗性 | 第160-163页 |
| 6.5 讨论与结论 | 第163-165页 |
| 第七章 全文结论 | 第165-167页 |
| 参考文献 | 第167-186页 |
| 附录 | 第186-239页 |
| 致谢 | 第239-240页 |
| 作者简介 | 第240-241页 |
