| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-22页 |
| 1. BVDV的概述 | 第14页 |
| 2. BVDV的发现 | 第14页 |
| 3. BVDV在国内外的流行现状 | 第14页 |
| 4. 病原学 | 第14-17页 |
| 4.1 主要生物学特征 | 第14-15页 |
| 4.2 病原生物学类型 | 第15页 |
| 4.3 基因组结构及功能 | 第15-17页 |
| 5. BVDV的诊断方法 | 第17-20页 |
| 5.1 病毒分离 | 第17-18页 |
| 5.2 免疫荧光技术和免疫组织化学技术 | 第18-19页 |
| 5.3 酶联免疫实验(ELISA)检测BVDV | 第19页 |
| 5.4 核酸检测技术 | 第19-20页 |
| 5.5 血清学实验 | 第20页 |
| 6. BVDV的防治 | 第20-21页 |
| 7. 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 研究一 BVDV单克隆抗体的制备 | 第22-38页 |
| 1. 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 毒株和细胞系,实验动物 | 第22-23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 MDBK的复苏与培养 | 第24-25页 |
| 2.2 BVDV的增殖 | 第25页 |
| 2.3 细胞的冻存 | 第25页 |
| 2.4 病毒浓缩与纯化 | 第25-26页 |
| 2.5 病毒滴度TCID_(50)的测定 | 第26页 |
| 2.6 免疫染色 | 第26页 |
| 2.7 动物免疫 | 第26-27页 |
| 2.8 ELISA测定小鼠免疫后的效价 | 第27页 |
| 2.9 细胞融合 | 第27-28页 |
| 2.10 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第28页 |
| 2.11 阳性杂交瘤细胞株的亚克隆 | 第28页 |
| 2.12 单抗腹水的制备以及效价的测定 | 第28-29页 |
| 2.13 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第29页 |
| 2.14 单克隆抗体腹水的纯化 | 第29-30页 |
| 2.15 单克隆抗体与CSFV的反应性 | 第30页 |
| 2.16 单克隆抗体的中和活性测定 | 第30页 |
| 2.17 单克隆抗体19A3H8的Dot-Blot实验 | 第30页 |
| 3. 实验结果 | 第30-37页 |
| 3.1 病毒的纯化 | 第30-31页 |
| 3.2 纯化前后的病毒效价 | 第31-33页 |
| 3.3 三免后小鼠血清效价的测定 | 第33页 |
| 3.4 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第33-34页 |
| 3.5 单克隆抗体腹水效价的测定 | 第34页 |
| 3.6 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.7 单克隆抗体与CSFV的反应性 | 第35页 |
| 3.8 单克隆抗体的中和活性测定 | 第35页 |
| 3.9 19A3H8单克隆抗体腹水的纯化 | 第35-36页 |
| 3.10 单克隆抗体19A3H8的Dot -Blot结果 | 第36-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-38页 |
| 研究二 一种NCP-BVDV抗病毒药物筛选方法的建立 | 第38-45页 |
| 1. 实验材料 | 第39页 |
| 1.1 主要试剂 | 第39页 |
| 1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 1.3 荧光定量引物 | 第39页 |
| 2. 实验方法 | 第39-41页 |
| 2.1 免疫染色测定病毒的感染量和时间 | 第39-40页 |
| 2.2 MTT确定三种药物不同浓度对细胞活性的影响 | 第40页 |
| 2.3 免疫染色测定三种药物不同浓度对病毒在MDBK细胞中复制的抑制情况 | 第40-41页 |
| 2.4 荧光定量PCR进一步验证三种药物对BVDV的抑制情况 | 第41页 |
| 3. 实验结果 | 第41-44页 |
| 3.1 免疫染色测定病毒的感染量和时间 | 第41-42页 |
| 3.2 MTT确定三种药物不同浓度对细胞活性的影响 | 第42页 |
| 3.3 利用免疫染色测定三种药物对病毒在MDBK细胞中复制的抑制作用 | 第42-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-45页 |
| 研究三 BVDV E~(rns) N-末端的原核表达以及BVDV E~(rns)的真核表达 | 第45-60页 |
| 1. 实验材料 | 第45-47页 |
| 1.1 质粒和菌种 | 第45-46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 1.4 实验所用主要试剂的配制 | 第46-47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-54页 |
| 2.1 原核表达N-末端E~(rns) | 第47-51页 |
| 2.2 真核表达BVDV E~(rns)和E2 | 第51-54页 |
| 3. 实验结果 | 第54-59页 |
| 3.1 BVDV N-末端E~(rns)基因的克隆以及鉴定 | 第54-57页 |
| 3.2 BVDV E~(rns)和E2基因真核表达 | 第57-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
