| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 Tgf2 转座子简介 | 第13-17页 |
| 1.1.1 Tgf2 转座子特性 | 第13页 |
| 1.1.2 Tgf2 转座子在团头鲂中的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 Tol2 转座子的结构特征 | 第14页 |
| 1.1.4 Tol2 转座子的转座机制 | 第14-15页 |
| 1.1.5 Tol2 转座子在模式生物斑马鱼中的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.6 Tol2 转座子在在青鳉中的应用 | 第16页 |
| 1.1.7 Tol2 转座子在罗非鱼中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 显微注射技术 | 第17-19页 |
| 1.2.1 显微注射原理 | 第17页 |
| 1.2.2 显微注射操作过程 | 第17页 |
| 1.2.3 显微注射的优缺点 | 第17页 |
| 1.2.4 显微注射技术在转基因海水鱼上的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.5 显微注射技术在金鲷上的应用 | 第18页 |
| 1.2.6 显微注射技术在鲑鳟鱼类上的应用 | 第18页 |
| 1.2.7 显微注射技术在真鲷和花鲈上的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 转基因鱼的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 转基因技术在水产育苗中的作用 | 第19页 |
| 1.3.2 转生长激素基因鱼和转荧光蛋白基因鱼 | 第19-21页 |
| 2 Tgf2 和普通表达载体的构建 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验鱼与载体来源 | 第21-22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 MCS 序列设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 pMD-18T/MCS 质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3 表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-EGFP（多克隆位点表达载体）的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.4 表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-EGFP 的 PCR 和酶切验证 | 第25页 |
| 2.2.5 目的基因 MIPS 扩增以及 pMD-18T/MIPS 质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.6 表达载体 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP 的构建 | 第26页 |
| 2.2.7 表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-MIPS-EGFP 的 PCR 和酶切验证 | 第26页 |
| 2.2.8 普通表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 MCS 序列的 PCR 扩增与克隆 | 第27页 |
| 2.3.2 表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-EGFP 的 PCR、酶切验证和测序结果 | 第27-28页 |
| 2.3.3 目的基因 MIPS 扩增与克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.4 表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-MIPS-EGFP 的 PCR、酶切验证和测序结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 普通表达载体的 PCR 扩增和测序结果 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 3 斑马鱼和罗非鱼显微注射 | 第32-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验鱼 | 第32页 |
| 3.1.2 转基因注射液配置 | 第32页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 注射针的制备 | 第33页 |
| 3.2.2 斑马鱼和罗非鱼受精卵的获得 | 第33-34页 |
| 3.2.3 斑马鱼外源目的基因的导入 | 第34页 |
| 3.2.4 罗非鱼外源目的基因的导入 | 第34页 |
| 3.2.5 转基因斑马鱼和罗非鱼受精卵的孵化以及荧光表达情况的观察 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-37页 |
| 3.3.1 重组表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-EGFP 在斑马鱼中的表达 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组表达载体 pTgf2-EF1α-MCS-MIPS-EGFP 在斑马鱼中 EGFP 的表达 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.4.1 显微注射针的拉制 | 第37页 |
| 3.4.2 重组表达载体的功能验证 | 第37-38页 |
| 4 转基因斑马鱼和罗非鱼的检测 | 第38-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 实验鱼 | 第38-39页 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 4.2.1 斑马鱼的低温耐受实验 | 第39页 |
| 4.2.2 罗非鱼的低温耐受实验 | 第39-40页 |
| 4.2.3 引物设计、合成与筛选 | 第40-42页 |
| 4.2.4 转基因斑马鱼和罗非鱼的 PCR 检测 | 第42页 |
| 4.2.5 总 RNA 的提取和 cDNA 第 1 条链的合成 | 第42页 |
| 4.2.6 实时荧光定量 PCR 反应体系和条件 | 第42-43页 |
| 4.2.7 数据处理 | 第43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-51页 |
| 4.3.0 斑马鱼和罗非鱼不同时间下的死亡率 | 第43-46页 |
| 4.3.1 斑马鱼半致死时间及差异显著性检验 | 第46页 |
| 4.3.2 PCR 检测引物筛选结果 | 第46-47页 |
| 4.3.3 重组表达载体在斑马鱼和罗非鱼中的 PCR 验证 | 第47-49页 |
| 4.3.4 总 RNA 的完整性及单链 cDNA 合成结果 | 第49-50页 |
| 4.3.5 特异性引物筛选结果 | 第50页 |
| 4.3.6 抗寒基因 MIPS 在斑马鱼和罗非鱼中的表达 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.4.1 转基因安全性检测方法 | 第51-52页 |
| 4.4.2 外源基因表达 | 第52-53页 |
| 4.4.3 转座子选择 | 第53页 |
| 4.4.4 实时荧光定量的优点 | 第53-54页 |
| 5 结语 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 在学研究成果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
