致病疫霉Pi-PIPKD5相互作用蛋白的鉴定
| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 插图和附表清单 | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| 1.1 疫霉菌简介 | 第11-12页 |
| 1.2 GPCR概述 | 第12-14页 |
| 1.3 酵母双杂交技术 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-45页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-25页 |
| 2.1.1 致病疫霉菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第16-18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基配方 | 第18-21页 |
| 2.1.5 主要溶液及配制方法 | 第21-24页 |
| 2.1.6 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.7 序列分析工具及软件 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-45页 |
| 2.2.1 诱饵表达载体的构建 | 第25-34页 |
| 2.2.2 诱饵蛋白的检测 | 第34-37页 |
| 2.2.3 cDNA文库的构建 | 第37-41页 |
| 2.2.4 酵母双杂交筛选 | 第41-43页 |
| 2.2.5 相互作用蛋白的验证 | 第43-45页 |
| 2.2.6 测序结果生物信息学分析 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-68页 |
| 3.1 诱饵表达载体的构建 | 第45-50页 |
| 3.1.1 N端、C端编码区PCR扩增 | 第46页 |
| 3.1.2 目的片段克隆载体菌落PCR | 第46-47页 |
| 3.1.3 目的片段克隆载体的序列测定 | 第47-48页 |
| 3.1.4 N端、C端诱饵表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.2 诱饵蛋白的检测 | 第50-55页 |
| 3.2.1 诱饵蛋白毒性检测 | 第50-53页 |
| 3.2.2 诱饵质粒自激活检测 | 第53-55页 |
| 3.3 菌株HQK8-3 cDNA文库的构建 | 第55-56页 |
| 3.3.1 RNA的提取 | 第55页 |
| 3.3.2 双链cDNA扩增 | 第55-56页 |
| 3.3.3 cDNA文库的构建 | 第56页 |
| 3.4 酵母双杂交筛选 | 第56-60页 |
| 3.4.1 文库滴度检测 | 第56-57页 |
| 3.4.2 诱饵质粒对文库的酵母双杂交筛选 | 第57-58页 |
| 3.4.3 阳性克隆在四缺培养基上进一步筛选 | 第58-60页 |
| 3.4.4 筛选出的猎物质粒快速菌落PCR鉴定 | 第60页 |
| 3.5 猎物蛋白与诱饵蛋白相互作用的回交验证 | 第60-65页 |
| 3.6 生物信息学分析 | 第65-68页 |
| 4 讨论与结论 | 第68-72页 |
| 4.1 讨论 | 第68-71页 |
| 4.1.1 试验技术讨论 | 第68-69页 |
| 4.1.2 相互作用蛋白功能预测 | 第69-71页 |
| 4.2 结论 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
