| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 前列腺癌的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 lncRNA在前列腺癌中的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 外泌体 | 第13-14页 |
| 1.4 竞争性内源RNA | 第14-15页 |
| 1.5 c-Myc在前列腺癌中的研究进展 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-40页 |
| 2.1 细胞培养 | 第17-18页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第17页 |
| 2.1.3 细胞复苏 | 第17页 |
| 2.1.4 细胞传代 | 第17-18页 |
| 2.1.5 细胞冻存 | 第18页 |
| 2.2 分子克隆 | 第18-24页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第18页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.3 5',3'- RACE技术 | 第19-21页 |
| 2.2.4 基因表达载体的构建 | 第21-24页 |
| 2.3 核质分离实验 | 第24-26页 |
| 2.3.1 试剂及配方 | 第24-25页 |
| 2.3.2 核质分离实验步骤 | 第25-26页 |
| 2.4 慢病毒包装 | 第26-27页 |
| 2.4.1 试剂和仪器 | 第26页 |
| 2.4.2 质粒转染 | 第26-27页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第27-30页 |
| 2.5.1 试剂及仪器 | 第27-28页 |
| 2.5.2 细胞总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.5.3 去除基因组DNA反应 | 第28页 |
| 2.5.4 逆转录反应(RT-PCR) | 第28-29页 |
| 2.5.5 qRT-PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.6 细胞增殖和迁移实验 | 第30-32页 |
| 2.6.1 试剂耗材与仪器 | 第30页 |
| 2.6.2 96孔板增殖实验 | 第30页 |
| 2.6.3 克隆形成实验 | 第30-31页 |
| 2.6.4 划痕实验 | 第31页 |
| 2.6.5 Transwell小室迁移实验 | 第31-32页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第32-35页 |
| 2.7.1 试剂及配方 | 第32-34页 |
| 2.7.2 Western blot实验步骤 | 第34-35页 |
| 2.8 双荧光素酶报告实验 | 第35-37页 |
| 2.8.1 双荧光素酶报告基因与miRNA共转染 | 第35-36页 |
| 2.8.2 双荧光素酶检测试剂准备 | 第36页 |
| 2.8.3 检测步骤 | 第36页 |
| 2.8.4 酶标仪检测程序 | 第36-37页 |
| 2.9 细胞周期检测 | 第37页 |
| 2.10 前列腺癌细胞外泌体的提取 | 第37页 |
| 2.11 lncRNA,miRNA,mRNA之间相关性分析 | 第37-38页 |
| 2.12 ChIP-Seq数据分析 | 第38页 |
| 2.13 实验数据统计学分析 | 第38页 |
| 2.14 研究技术路线 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-69页 |
| 3.1 前列腺癌相关lncRNAs的筛选 | 第40页 |
| 3.2 MYU转录本鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 MYU在前列腺癌高表达 | 第41-43页 |
| 3.3.1 MYU在多种癌症中表达 | 第41-42页 |
| 3.3.2 MYU启动子区低甲基化 | 第42页 |
| 3.3.3 MYU是潜在的诊断标志物 | 第42-43页 |
| 3.4 MYU分子特征 | 第43-48页 |
| 3.4.1 MYU克隆 | 第43-44页 |
| 3.4.2 MYU非编码性确认 | 第44-46页 |
| 3.4.3 MYU转录活性 | 第46-47页 |
| 3.4.4 MYU亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.5 MYU与VPS9D1相关性 | 第48-52页 |
| 3.5.1 VPS9D1基因 | 第48-50页 |
| 3.5.2 MYU与VPS9D1在RNA水平上不相关 | 第50-51页 |
| 3.5.3 MYU不影响VPS9D1蛋白水平 | 第51-52页 |
| 3.6 MYU体外促进细胞增殖和迁移 | 第52-56页 |
| 3.6.1 MYU表达量 | 第52-53页 |
| 3.6.2 MYU促进前列腺癌细胞增殖 | 第53-54页 |
| 3.6.3 MYU促进前列腺癌细胞迁移 | 第54-56页 |
| 3.7 MYU功能性二级结构预测及鉴定 | 第56-59页 |
| 3.8 MYU的ceRNA网络调控机制 | 第59-65页 |
| 3.8.1 与MYU呈负相关的miRNAs | 第59-60页 |
| 3.8.2 MYU,miR-184和c-Myc之间的相关性 | 第60-61页 |
| 3.8.3 miR-184结合位点预测 | 第61页 |
| 3.8.4 双荧光素酶报告实验结果 | 第61-62页 |
| 3.8.5 MYU促进c-Myc mRNA和蛋白水平上调 | 第62-63页 |
| 3.8.6 MYU不影响细胞周期进程 | 第63页 |
| 3.8.7 c-Myc挽救实验 | 第63-64页 |
| 3.8.8 miR-184挽救实验 | 第64-65页 |
| 3.9 MYU通过外泌体发挥生物学功能 | 第65-69页 |
| 3.9.1 细胞上清中外泌体的分离 | 第65-66页 |
| 3.9.2 外泌体中存在MYU | 第66-67页 |
| 3.9.3 外泌体中的MYU促进细胞增殖和迁移 | 第67-68页 |
| 3.9.4 外泌体中的MYU促进c-Myc表达 | 第68-69页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第82页 |
