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RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建及猪PID1基因多态性与肌内脂肪含量关联分析

英文缩略词表第4-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 引言第12-24页
    1.1 转基因技术方法第12-15页
        1.1.1 原核期胚胎显微注射法第12-13页
        1.1.2 胚胎干细胞介导法第13页
        1.1.3 慢病毒载体法第13-14页
        1.1.4 人工染色体介导的基因转移法第14页
        1.1.5 精子载体法第14页
        1.1.6 体细胞克隆介导法第14-15页
    1.2 转基因动物的应用第15-16页
        1.2.1 建立人类疾病的动物模型第15页
        1.2.2 生产可移植的动物器官第15-16页
        1.2.3 动物育种和生产性能改良第16页
        1.2.4 作为动物反应器的研究第16页
    1.3 转基因存在的问题第16-17页
    1.4 转基因技术的展望第17页
    1.5 RNAi 技术第17-18页
    1.6 RNA 干扰机制第18页
    1.7 RNA 干扰技术的应用第18-21页
        1.7.1 研究基因的功能第18-19页
        1.7.2 利用 RNAi 建立动物疾病模型第19页
        1.7.3 研究细胞信号通路第19-20页
        1.7.4 RNAi 抗病毒治疗第20页
        1.7.5 基因治疗第20页
        1.7.6 RNA 干扰在动物抗病育种的应用第20-21页
    1.8 肌内脂肪沉积以及 PID1 基因研究进展第21-23页
        1.8.1 肌内脂肪沉积相关研究第21-22页
        1.8.2 PID1 基因研究进展第22-23页
    1.9 本研究的目的和意义第23-24页
2 材料与方法第24-41页
    2.1 实验材料第24-27页
        2.1.1 实验动物第24页
        2.1.2 主要仪器第24-25页
        2.1.3 RNA 干扰表达载体第25页
        2.1.4 酶和试剂第25-26页
        2.1.5 主要数据库及生物软件第26页
        2.1.6 常用试剂的配制第26-27页
    2.2 试验方法第27-41页
        2.2.1 重组质粒的线性化第27-28页
        2.2.2 shRNA 表达载体的睾丸内注射第28页
        2.2.3 F1 代个体出生及样品采集第28-29页
        2.2.4 F1 代仔兔活体荧光检测第29页
        2.2.5 F1 代仔兔 PCR 检测第29-30页
        2.2.6 F1 代仔兔繁殖性能和生长性能的测定第30-31页
        2.2.7 F1 代个体肉质性状的测定第31-32页
        2.2.8 实时荧光定量 PCR 检测 PID1 基因 mRNA 的表达水平第32-35页
        2.2.9 Western blot 检测 PID1 基因蛋白表达水平第35-38页
        2.2.10 PID1 基因 CDS 区多态性分析第38-41页
    2.3 统计学分析第41页
3 结果与分析第41-53页
    3.1 试验兔繁殖的结果第41-42页
    3.2 F1 代仔兔出生和样品采集第42页
    3.3 F1 代仔兔活体荧光检测第42-43页
    3.4 F1 代仔兔 PCR 检测第43页
    3.5 F1 代生长性能测定第43-44页
    3.6 F1 代兔肉质性状的测定第44-50页
        3.6.1 肌内脂肪的测定第44-45页
        3.6.2 滴水损失和失水率的测定第45-46页
        3.6.3 肌肉嫩度的测定第46页
        3.6.4 屠宰后 45 min pH 和 24 h pH第46-47页
        3.6.5 F1 代仔兔抗氧化性能指标的测定第47-48页
        3.6.6 qRT-PCR 检测 PID1 基因的表达第48-49页
        3.6.7 Western blot 检测 PID1 蛋白的表达第49-50页
    3.7 猪 PID1 基因 CDS 区的多态性分析第50-53页
4 讨论第53-56页
    4.1 转基因对动物的影响第53页
    4.2 RNA 干扰肉兔的构建与检测第53-54页
    4.3 PID1 基因与肌内脂肪的联系第54-56页
5 结论第56-57页
参考文献第57-66页
致谢第66-67页
攻读学位期间发表论文情况第67页

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