| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-23页 |
| 1.1 蚯蚓的研究概况 | 第16-18页 |
| 1.1.1 蚯蚓活性物质种类 | 第16页 |
| 1.1.2 蚯蚓活性蛋白 | 第16-17页 |
| 1.1.3 活性蛋白的分离 | 第17-18页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第18-20页 |
| 1.2.1 细胞凋亡简介 | 第18页 |
| 1.2.2 细胞凋亡的信号传导通路 | 第18-20页 |
| 1.2.3 细胞凋亡与肿瘤 | 第20页 |
| 1.3 p53信号通路 | 第20-21页 |
| 1.3.1 p53基因的结构与功能 | 第20页 |
| 1.3.2 p53信号通路与肿瘤 | 第20-21页 |
| 1.4 ERK1/2信号通路 | 第21页 |
| 1.4.1 ERK信号通路简介 | 第21页 |
| 1.4.2 ERK信号通路与肿瘤 | 第21页 |
| 1.5 课题研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 蚯蚓活性蛋白的分离提取 | 第23-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验原料 | 第23页 |
| 2.1.2 实验试剂与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 蚯蚓干体总蛋白含量的测定 | 第24页 |
| 2.2.2 蚯蚓匀浆 | 第24页 |
| 2.2.3 蛋白盐析 | 第24页 |
| 2.2.4 透析除盐 | 第24-25页 |
| 2.2.5 蚯蚓活性蛋白纯度和分子量范围测定 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25页 |
| 2.3.1 蚯蚓干体总蛋白含量的测定 | 第25页 |
| 2.3.2 蚯蚓干体中蛋白的分离提取 | 第25页 |
| 2.3.3 蚯蚓活性蛋白纯度和分子量范围测定 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 蚯蚓活性蛋白对结肠癌DLD-1细胞的作用研究 | 第27-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 实验器材 | 第27页 |
| 3.1.2 实验仪器及设备 | 第27页 |
| 3.1.3 试剂及药品 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要溶液及试剂配方 | 第28-29页 |
| 3.2 方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 DLD-1细胞的培养方法 | 第29-30页 |
| 3.2.2 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞活力及细胞形态的影响 | 第30-32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-37页 |
| 3.3.1 细胞增殖体外活性测定 | 第32-33页 |
| 3.3.2 MTT法确定蚯蚓蛋白的最佳给药浓度以及最佳给药时间 | 第33-34页 |
| 3.3.3 光学显微镜下观察DLD-1细胞形态的变化 | 第34页 |
| 3.3.4 Hoechst 33342/PI染结果 | 第34-35页 |
| 3.3.5 体内抗肿瘤活性测定 | 第35-36页 |
| 3.3.6 蚯蚓活性蛋白对结肠癌细胞DLD-1迁移能力的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 蚯蚓活性蛋白抗结肠癌DLD-1细胞活性机制的研究 | 第40-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-44页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂及药品 | 第40-41页 |
| 4.1.3 主要溶液配方 | 第41-44页 |
| 4.2 方法 | 第44-50页 |
| 4.2.1 Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 4.2.2 流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位 | 第45页 |
| 4.2.3 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞细胞周期的影响 | 第45页 |
| 4.2.4 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞蛋白表达的影响 | 第45-49页 |
| 4.2.5 凋亡细胞DNA电泳 | 第49-50页 |
| 4.2.6 统计学处理方法 | 第50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-56页 |
| 4.3.1 Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 4.3.2 JC-1染色检测线粒体膜电位 | 第51页 |
| 4.3.3 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞细胞周期的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.4 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞蛋白表达的影响 | 第53-55页 |
| 4.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-61页 |
| 4.4.1 Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第56页 |
| 4.4.2 JC-1染色检测线粒体膜电位 | 第56-57页 |
| 4.4.3 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞细胞周期的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.4 蚯蚓活性蛋白对DLD-1细胞蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第59页 |
| 4.4.6 小结 | 第59-61页 |
| 论文总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第73页 |
