| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| PART Ⅰ通过提高GSH水平完善小鼠裸卵体外成熟系统 | 第15-62页 |
| 1 前言 | 第15-33页 |
| 1.1 卵母细胞成熟 | 第15-19页 |
| 1.1.1 卵母细胞核成熟和胞质成熟 | 第16页 |
| 1.1.2 卵母细胞体外成熟 | 第16-17页 |
| 1.1.3 影响卵母细胞体外成熟的因素 | 第17-18页 |
| 1.1.4 卵母细胞体外成熟质量的判定标准 | 第18-19页 |
| 1.2 裸卵的体外成熟 | 第19-22页 |
| 1.2.1 研究裸卵体外成熟的重要意义 | 第19-20页 |
| 1.2.2 卵丘细胞在卵母细胞成熟过程中的作用 | 第20-21页 |
| 1.2.3 裸卵体外成熟系统的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 细胞中谷胱甘肽的合成及其重要作用 | 第22-28页 |
| 1.3.1 哺乳动物细胞中的谷胱甘肽 | 第22-25页 |
| 1.3.2 卵母细胞中的谷胱甘肽 | 第25-28页 |
| 1.4 巯基物质促进GSH合成的机制 | 第28-32页 |
| 1.4.1 胱氨酸在GSH合成中的作用 | 第28-30页 |
| 1.4.2 半胱胺在GSH合成中的作用 | 第30-31页 |
| 1.4.3 半胱胺和胱氨酸之间的相互作用 | 第31-32页 |
| 1.5 本研究的主要内容 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-41页 |
| 2.1 主要试剂及配制 | 第33-34页 |
| 2.2 实验动物饲养及小鼠超排处理 | 第34页 |
| 2.3 小鼠卵母细胞获取 | 第34页 |
| 2.4 山羊卵母细胞获取 | 第34-35页 |
| 2.5 小鼠及山羊卵丘细胞单层的制备 | 第35页 |
| 2.6 小鼠卵母细胞体外成熟培养 | 第35页 |
| 2.7 小鼠卵母细胞体外受精及原核观察 | 第35-36页 |
| 2.8 透明带硬化检测 | 第36页 |
| 2.9 小鼠卵母细胞化学激活 | 第36页 |
| 2.10 胚胎培养 | 第36页 |
| 2.11 GSH水平检测 | 第36-37页 |
| 2.12 胚胎移植 | 第37-38页 |
| 2.13 巯基物质的毛细管电泳检测 | 第38页 |
| 2.14 通过RT-PCR检测卵丘细胞中xCTmRNA表达 | 第38-40页 |
| 2.15 卵丘细胞中胱氨酸还原酶活性检测 | 第40页 |
| 2.16 数据分析 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-55页 |
| 3.1 向成熟培养液中添加半胱胺和胱氨酸对小鼠卵母细胞GSH合成的影响 | 第41-43页 |
| 3.1.1 向成熟培养液中添加不同浓度的胱氨酸对小鼠卵母细胞胞质中GSH合成的影响 | 第41页 |
| 3.1.2 向成熟培养液中添加不同浓度的半胱胺对小鼠卵母细胞胞质中GSH合成的影响 | 第41页 |
| 3.1.3 向M16培养基中同时添加胱氨酸和半胱胺对小鼠卵母细胞胞质中GSH水平以及受精后雄原核形成的影响 | 第41-43页 |
| 3.2 向成熟培养基中添加胱氨酸和半胱胺对山羊卵母细胞胞质中GSH水平的影响 | 第43页 |
| 3.3 向M16培养基中添加胱氨酸和半胱胺对共培养的小鼠DOs和小鼠/山羊卵丘细胞单层中GSH合成的影响 | 第43-45页 |
| 3.4 半胱胺和胱氨酸在不同条件下对半胱氨酸生成的影响 | 第45-48页 |
| 3.5 体外成熟过程中半胱胺和胱氨酸协同作用能够显著改善小鼠COCs孤雌激活后的发育能力 | 第48页 |
| 3.6 体外成熟过程中半胱胺、胱氨酸和卵丘细胞相互作用能够提高小鼠DOs孤雌激活后的胚胎发育能力 | 第48-50页 |
| 3.7 添加巯基成分和小鼠卵丘细胞单层共培养对小鼠DOs IVF后体外和体内胚胎发育能力的影响 | 第50-53页 |
| 3.7.1 添加巯基成分和小鼠卵丘细胞单层共培养对小鼠卵母细胞体外受精率以及透明带硬化的影响 | 第50页 |
| 3.7.2 添加巯基成分和小鼠卵丘细胞单层共培养对小鼠DOs IVF后胚胎体外发育的影响 | 第50-52页 |
| 3.7.3 添加巯基成分和小鼠卵丘细胞单层共培养对小鼠DOs IVF后胚胎体内发育的影响 | 第52-53页 |
| 3.8 小鼠和山羊卵丘细胞利用胱氨酸不同原因的初步探讨 | 第53-55页 |
| 3.8.1 小鼠和山羊卵丘细胞胱氨酸转运体系X_c~-中调节亚基xCT mRNA表达 | 第53页 |
| 3.8.2 小鼠和山羊卵丘细胞中胱氨酸还原酶活性 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-61页 |
| 4.1 通过采用成分明确的体外成熟系统证明只有半胱胺和胱氨酸同时存在才能促进小鼠卵母细胞的GSH合成 | 第55-56页 |
| 4.2 半胱胺和胱氨酸主要通过生成半胱氨酸促进卵母细胞的GSH合成 | 第56-57页 |
| 4.3 小鼠卵丘细胞与合适浓度的半胱胺和胱氨酸相互作用能够使小鼠裸卵的胚胎发育能力完全恢复到最佳水平 | 第57-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| PART Ⅱ束缚应激对小鼠卵母细胞染色体倍性的影响 | 第62-98页 |
| 1 前言 | 第62-74页 |
| 1.1 心理应激和心理应激动物模型 | 第63-64页 |
| 1.1.1 心理应激的概念 | 第63页 |
| 1.1.2 心理应激动物模型的建立 | 第63-64页 |
| 1.1.3 心理应激对雌性动物生殖的影响 | 第64页 |
| 1.2 细胞染色体非整倍性的发生 | 第64-72页 |
| 1.2.1 何为染色体 | 第64-66页 |
| 1.2.2 卵母细胞染色体的非整倍性 | 第66-69页 |
| 1.2.3 卵母细胞非整倍性形成的机制 | 第69-72页 |
| 1.3 应激对机体染色体的影响 | 第72-73页 |
| 1.3.1 应激对体细胞染色体的影响 | 第72-73页 |
| 1.3.2 应激对生殖细胞染色体的影响 | 第73页 |
| 1.4 本研究的主要内容 | 第73-74页 |
| 2 材料与方法 | 第74-77页 |
| 2.1 主要试剂及配制 | 第74页 |
| 2.2 实验动物饲养及小鼠超排处理 | 第74页 |
| 2.3 束缚应激处理 | 第74页 |
| 2.4 小鼠卵母细胞获取及体外成熟培养 | 第74页 |
| 2.5 小鼠卵母细胞化学激活及胚胎培养 | 第74页 |
| 2.6 小鼠卵母细胞减数分裂染色体制备 | 第74-75页 |
| 2.7 2-4cell胚胎染色体观察 | 第75页 |
| 2.8 胞质中氧化型和还原型谷胱甘肽水平的测定 | 第75-76页 |
| 2.9 小鼠卵母细胞α-微管蛋白染色 | 第76页 |
| 2.10 小鼠卵母细胞中MAD2蛋白的western blot检测 | 第76页 |
| 2.11 数据分析 | 第76-77页 |
| 3 结果 | 第77-88页 |
| 3.1 束缚应激对小鼠卵母细胞胚胎发育能力的影响 | 第77-78页 |
| 3.1.1 束缚应激对小鼠卵母细胞胚胎发育进程及囊胚发育率的影响 | 第77-78页 |
| 3.1.2 束缚应激对小鼠卵母细胞孤雌激活囊胚细胞数的影响 | 第78页 |
| 3.2 束缚应激对小鼠MⅡ期卵母细胞染色体的影响 | 第78-80页 |
| 3.2.1 小鼠MⅡ期卵母细胞染色体分析标准 | 第78-80页 |
| 3.2.2 束缚应激对小鼠MⅡ期卵母细胞染色体非整倍性和姐妹染色单体提前分离(PSSC)的影响 | 第80页 |
| 3.3 束缚应激对小鼠卵母细胞孤雌激活后胚胎染色体的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.1 小鼠卵母细胞在α-MEM培养液中培养成熟后经孤雌激活后胚胎的发育能力 | 第80-81页 |
| 3.3.2 束缚应激对小鼠卵母细胞孤雌激活后胚胎染色体的影响 | 第81-82页 |
| 3.4 束缚应激对小鼠MⅠ期卵母细胞纺锤体组装和染色体的影响 | 第82-86页 |
| 3.4.1 在改进的α-MEM培养液成熟系统下小鼠卵母细胞的成熟进程 | 第82-83页 |
| 3.4.2 小鼠MⅠ期卵母细胞纺锤体组装和染色体排队的观察及分析标准 | 第83-85页 |
| 3.4.3 束缚应激对小鼠MⅠ期卵母细胞纺锤体组装和染色体排队的影响 | 第85页 |
| 3.4.4 束缚应激对小鼠MⅠ期卵母细胞染色体的影响 | 第85-86页 |
| 3.5 束缚应激对小鼠卵母细胞MAD2水平的影响 | 第86页 |
| 3.6 束缚应激对小鼠卵母细胞谷胱甘肽水平的影响 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-97页 |
| 4.1 束缚应激影响小鼠卵母细胞孤雌激活胚胎的囊胚发育能力和胚胎发育进程 | 第88-89页 |
| 4.2 束缚应激应激能够造成小鼠MⅡ期卵母细胞以及孤雌激活后胚胎染色体非整倍性的增加 | 第89-91页 |
| 4.3 束缚应激影响MⅠ期卵母细胞纺锤体组装但不影响MⅠ期卵母细胞染色体 | 第91-93页 |
| 4.4 束缚应激造成小鼠卵母细胞MAD2蛋白表达发生紊乱 | 第93-95页 |
| 4.5 束缚应激能够造成小鼠卵母细胞胞质中巯基还原能力的减弱 | 第95-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-120页 |
| References of PARTⅠ | 第98-109页 |
| References of PART Ⅱ | 第109-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| Publication List | 第121页 |
