| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 药用蛋白质的种类 | 第13-14页 |
| 1.1.1 人体自身所缺失的蛋白 | 第13页 |
| 1.1.2 细菌所产生的蛋白 | 第13页 |
| 1.1.3 细胞因子 | 第13-14页 |
| 1.2 药用蛋白质的免疫原性 | 第14页 |
| 1.3 临床评估药用蛋白质的免疫原性 | 第14-16页 |
| 1.3.1 抗体的监测 | 第15页 |
| 1.3.2 传统的动物模型 | 第15-16页 |
| 1.3.3 T细胞体内激活分析 | 第16页 |
| 1.4 降低药用蛋白质的免疫原性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 聚乙二醇(PEG)修饰药用蛋白质 | 第16-17页 |
| 1.4.2 去除药用蛋白质的T细胞表位 | 第17页 |
| 1.4.3 药用蛋白质的人源化 | 第17-18页 |
| 1.5 展望 | 第18-19页 |
| 2 葡激酶T细胞表位区域18-34关键氨基酸的筛选 | 第19-30页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第22-29页 |
| 2.2.1 葡激酶T细胞表位区域18-34关键氨基酸的筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.2 低免疫原性葡激酶突变体表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.3 葡激酶突变体重组蛋白的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.4 突变体蛋白的活性的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 SWISS-MODEL模拟葡激酶突变体的空间结构 | 第27-29页 |
| 2.3 小结 | 第29-30页 |
| 3 低免疫原性葡激酶突变体表达、纯化与理化性质的分析 | 第30-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第30-33页 |
| 3.1.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第30-33页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第33-44页 |
| 3.2.1 重组蛋白的分离纯化 | 第33-39页 |
| 3.2.2 HPLC检测突变体的纯度 | 第39-41页 |
| 3.2.3 葡激酶突变体纤溶活性的测定 | 第41-43页 |
| 3.2.4 葡激酶突变体细菌内毒素的测定 | 第43页 |
| 3.2.5 葡激酶突变体蛋白稳定性的测定 | 第43-44页 |
| 3.3 小结 | 第44-45页 |
| 4 低免疫原性葡激酶突变体的免疫原性分析 | 第45-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-47页 |
| 4.1.1 材料 | 第45页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第47-49页 |
| 4.2.1 间接ELISA法检测小鼠血清中葡激酶抗体的含量 | 第47页 |
| 4.2.2 突变体的抗体反应性检测 | 第47-48页 |
| 4.2.3 葡激酶突变体刺激淋巴细胞增殖 | 第48-49页 |
| 4.3 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 存在问题与下一步研究方向 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第62页 |
