用于牛奶中单增李斯特菌检测的电化学免疫传感技术的研究
| 部分英文縮略词 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第14-33页 |
| 1. 单增李斯特菌概况 | 第15-19页 |
| 1.1 李斯特菌的分类 | 第15页 |
| 1.2 单增李斯特菌的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.3 单增李斯特菌在食品中的污染现状 | 第16页 |
| 1.4 单增李斯特菌检测方法的研究概况 | 第16-19页 |
| 2. 生物传感器 | 第19-25页 |
| 2.1 生物传感器简介 | 第20-21页 |
| 2.2 生物传感器的分类 | 第21-25页 |
| 3. 生物识别元素和固定方法 | 第25-28页 |
| 3.1 物理吸附 | 第27页 |
| 3.2 亲和素-生物素系统 | 第27页 |
| 3.3 自组装单分子膜 | 第27-28页 |
| 4. 电化学检测技术 | 第28-30页 |
| 4.1 电位扫描方法 | 第28页 |
| 4.2 循环伏安法 | 第28-29页 |
| 4.3 电化学阻抗谱 | 第29-30页 |
| 4.4 差示脉冲伏安法 | 第30页 |
| 4.5 计时电流法 | 第30页 |
| 5. 生物传感器在检测单增李斯特菌方面的应用 | 第30-31页 |
| 6. 本研究的目的意义与内容 | 第31-33页 |
| 6.1 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 6.2 研究的内容 | 第32-33页 |
| 第二章 单增李斯特菌多克隆抗体的制备 | 第33-44页 |
| 1. 实验材料 | 第33-36页 |
| 1.1 菌株和实验动物 | 第33页 |
| 1.2 主要仪器及耗材 | 第33-34页 |
| 1.3 主要试剂 | 第34页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第34-36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-39页 |
| 2.1 抗原的制备 | 第36页 |
| 2.2 动物免疫 | 第36-37页 |
| 2.3 间接ELISA实验条件的确定 | 第37页 |
| 2.4 抗血清的纯化与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.5 酶标抗体的合成及鉴定 | 第38-39页 |
| 3. 结果与讨论 | 第39-43页 |
| 3.1 ELISA实验条件的优化 | 第39页 |
| 3.2 间接ELISA跟踪多抗的制备 | 第39-40页 |
| 3.3 单增李斯特菌抗血清的纯化 | 第40-41页 |
| 3.4 BCA蛋白定量纯化抗体的浓度 | 第41页 |
| 3.5 SDS-PAGE鉴定抗血清纯化的效果 | 第41-42页 |
| 3.6 酶标抗体的鉴定 | 第42-43页 |
| 4. 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 单增李斯特菌单克隆抗体的制备 | 第44-64页 |
| 1. 实验材料 | 第45-48页 |
| 1.1 菌株和实验动物 | 第45页 |
| 1.2 融合用骨髓瘤细胞 | 第45页 |
| 1.3 主要试剂 | 第45-46页 |
| 1.4 主要仪器及耗材 | 第46页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第46-48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-56页 |
| 2.1 抗原的制备 | 第48页 |
| 2.2 动物的免疫 | 第48-49页 |
| 2.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第49-51页 |
| 2.4 杂交瘤细胞株的筛选 | 第51-53页 |
| 2.5 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第53页 |
| 2.6 阳性单细胞株稳定性测试 | 第53页 |
| 2.7 阳性杂交瘤细胞的染色体分析 | 第53-54页 |
| 2.8 单克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| 2.9 单克隆抗体的纯化及鉴定 | 第55-56页 |
| 3. 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.1 小鼠的免疫及免疫效价的测定 | 第56-57页 |
| 3.2 ELISA方法的建立 | 第57页 |
| 3.3 细胞融合的结果 | 第57-58页 |
| 3.4 杂交瘤细胞的筛选与亚克隆结果 | 第58-59页 |
| 3.5 杂交瘤细胞株的建立 | 第59-60页 |
| 3.6 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第60页 |
| 3.7 腹水型单克隆抗体的纯化及性质鉴定 | 第60-61页 |
| 4. 结果与讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 免疫方案 | 第61-62页 |
| 4.2 细胞的融合 | 第62页 |
| 4.3 杂交瘤细胞的筛选 | 第62页 |
| 4.4 细胞培养中的污染 | 第62-63页 |
| 5. 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 电化学免疫传感器的构建 | 第64-72页 |
| 1. 实验材料 | 第64-66页 |
| 1.1 实验耗材与仪器 | 第64页 |
| 1.2 实验试剂 | 第64-65页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第65-66页 |
| 2. 实验部分 | 第66-67页 |
| 2.1 电极的选择 | 第66页 |
| 2.2 工作电极的处理 | 第66页 |
| 2.3 循环伏安工作电压范围的选择 | 第66页 |
| 2.4 自组装试剂的选择 | 第66-67页 |
| 2.5 实验所用水质的选择 | 第67页 |
| 2.6 自组装电极用于免疫分析 | 第67页 |
| 2.7 测试底液的选择 | 第67页 |
| 3. 结果与讨论 | 第67-71页 |
| 3.1 电极的选择 | 第67-68页 |
| 3.2 金电极的处理 | 第68页 |
| 3.3 循环伏安法工作电压范围的优化 | 第68-69页 |
| 3.4 自组装试剂的选择 | 第69页 |
| 3.5 实验所用水质的选择 | 第69-70页 |
| 3.6 pH的选择 | 第70页 |
| 3.7 免疫分析的表征 | 第70-71页 |
| 3.8 测试底液的选择 | 第71页 |
| 4. 小结 | 第71-72页 |
| 第五章 电化学免疫传感器用于单增李斯特菌的检测 | 第72-87页 |
| 1. 实验材料 | 第72-74页 |
| 1.1 生化试剂 | 第72页 |
| 1.2 细菌菌株 | 第72-73页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第73-74页 |
| 1.4 仪器及耗材 | 第74页 |
| 2. 实验部分 | 第74-75页 |
| 2.1 单增李斯特菌的培养与平板计数 | 第74页 |
| 2.2 免疫传感器的制备 | 第74页 |
| 2.3 免疫传感器的电化学表征 | 第74页 |
| 2.4 免疫反应和检测过程 | 第74-75页 |
| 3. 结果与讨论 | 第75-85页 |
| 3.1 免疫传感器的制备 | 第75-76页 |
| 3.2 电化学免疫传感器的表征 | 第76-77页 |
| 3.3 实验条件的优化 | 第77-82页 |
| 3.4 电化学检测PBS中的单增李斯特菌 | 第82页 |
| 3.5 方法比对 | 第82-83页 |
| 3.6 特异性分析实验 | 第83-84页 |
| 3.7 电化学免疫传感器检测牛奶中的单增李斯特菌 | 第84-85页 |
| 3.8 免疫传感器的再生性 | 第85页 |
| 4. 结论 | 第85-87页 |
| 第六章 全文结论与展望 | 第87-90页 |
| 1. 主要结论 | 第87-88页 |
| 1.1 单增李斯特菌多抗的制备 | 第87页 |
| 1.2 单增李斯特菌单抗的制备 | 第87页 |
| 1.3 电化学免疫传感器检测单增李斯特菌 | 第87-88页 |
| 2. 存在的问题 | 第88页 |
| 3. 展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附 攻读硕士学位期间发表的论文与专利 | 第100页 |
