| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一章 Vero细胞培养乙型流感病毒的研究 | 第15-27页 |
| 第一节 Vero细胞培养乙型流感病毒流行株 | 第15-22页 |
| 1. 引言 | 第15页 |
| 2. 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1 病毒 | 第15页 |
| 2.2 细胞 | 第15-16页 |
| 2.3 鸡胚 | 第16页 |
| 2.4 主要试剂 | 第16页 |
| 2.5 耗材 | 第16页 |
| 2.6 仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2.7 主要溶液 | 第17页 |
| 3. 实验方法 | 第17-19页 |
| 3.1 Vero细胞、MDCK细胞的传代培养 | 第17-18页 |
| 3.2 病毒制备 | 第18页 |
| 3.3 血凝滴度测定 | 第18-19页 |
| 4. 实验结果 | 第19-20页 |
| 4.1 流行株在鸡胚上的增殖情况 | 第19页 |
| 4.2 流行株在Vero细胞上的增殖情况 | 第19-20页 |
| 5. 讨论 | 第20-21页 |
| 6. 小结 | 第21-22页 |
| 第二节 乙型流感病毒Vero细胞冷适应株BVca的生物学性状 | 第22-27页 |
| 1. 引言 | 第22页 |
| 2. 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1 病毒 | 第22页 |
| 2.2 细胞 | 第22页 |
| 2.3 主要溶液配置 | 第22页 |
| 2.4 主要耗材及仪器 | 第22-23页 |
| 3. 实验方法 | 第23-24页 |
| 3.1 病毒制备 | 第23页 |
| 3.2 流感病毒组织培养半数感染量(TCID_(50))滴定 | 第23-24页 |
| 3.3 乙型流感病毒ts、ca特征的判定 | 第24页 |
| 4. 实验结果 | 第24-25页 |
| 4.1 BVca、BCa在Vero细胞上的增殖情况 | 第24-25页 |
| 4.2 乙型流感病毒的ts和ca表型特征观察 | 第25页 |
| 5. 讨论 | 第25-26页 |
| 6. 小结 | 第26-27页 |
| 第二章 乙型流感病毒Vero细胞冷适应株重配研究 | 第27-52页 |
| 引言 | 第27-29页 |
| 第一节 羊抗BVca血清的制备 | 第29-33页 |
| 1. 实验材料 | 第29页 |
| 1.1 病毒 | 第29页 |
| 1.2 实验动物 | 第29页 |
| 1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2. 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.1 免疫抗原的制备与纯化 | 第29页 |
| 2.2 免疫 | 第29-30页 |
| 2.3 抗血清评估、去交叉处理 | 第30页 |
| 3. 实验结果 | 第30-31页 |
| 3.1 抗血清滴度的变化 | 第30-31页 |
| 3.2 抗血清的去交叉 | 第31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 5. 小结 | 第32-33页 |
| 第二节 乙型流感病毒Vero细胞冷适应株遗传重配研究 | 第33-52页 |
| 1. 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 病毒 | 第33页 |
| 1.2 细胞 | 第33页 |
| 1.4 抗血清 | 第33页 |
| 1.5 主要溶液 | 第33页 |
| 1.6 试验动物 | 第33页 |
| 1.7 菌种 | 第33页 |
| 1.8 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 1.9 主要耗材及试剂 | 第34页 |
| 2. 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.1 在Vero细胞上的遗传重配研究 | 第34-36页 |
| 2.2 动物试验 | 第36-37页 |
| 2.3 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的基因分析 | 第37-40页 |
| 3. 实验结果 | 第40-51页 |
| 3.1 第一代重配病毒试验结果 | 第40-42页 |
| 3.2 重配乙型流感病毒在连续加抗血清中和后在Vero细胞上培养出病毒的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 蚀斑实验纯化病毒 | 第43-44页 |
| 3.4 重配乙型流感病毒BVca的安全性评价 | 第44-46页 |
| 3.4.1 重配乙型流感病毒BVca的小鼠毒力实验 | 第44-46页 |
| 3.4.2 鼠接种重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株后的肺部病理检查 | 第46页 |
| 3.5 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株att特征的评价 | 第46-47页 |
| 3.6 重配流感病毒ts和ca表型研究 | 第47-48页 |
| 3.7 重配病毒BX-35Vca的基因组鉴定 | 第48-51页 |
| 3.7.1 重配乙型流感病毒基因的扩增与连接 | 第48-51页 |
| 6. 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 重配乙型流感病毒BX-35Vca在Vero细胞的传代稳定性及免疫原性研究 | 第52-75页 |
| 引言 | 第52页 |
| 第一节 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的传代稳定性评价 | 第52-64页 |
| 1. 实验材料 | 第52-53页 |
| 1.1 病毒 | 第52页 |
| 1.2 细胞 | 第52页 |
| 1.3 菌种 | 第52-53页 |
| 1.4 主要试剂及耗材 | 第53页 |
| 1.5 试剂盒 | 第53页 |
| 1.7 主要仪器设备和耗材 | 第53页 |
| 2. 实验方法 | 第53-57页 |
| 2.1 重配乙型流感Vero细胞冷适应株连续在Vero细胞上传代的产量分析 | 第53页 |
| 2.2 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的血清学鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株BX-35Vca的基因稳定性分析 | 第54页 |
| 2.4 重配乙型流感病毒ts、ca特征的判定 | 第54页 |
| 2.5 重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株在Vero细胞上的增殖研究 | 第54-56页 |
| 2.6 重配病毒的无菌检测 | 第56-57页 |
| 3. 实验结果 | 第57-62页 |
| 3.1 BX-35Vca在Vero细胞上的连续传代 | 第57页 |
| 3.2 BX-35Vca的血凝抑制实验鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3 BX-35Vca的ts、ca特征检测 | 第58页 |
| 3.4 BX-35Vca的单向免疫扩散实验(Single Radial Immunodiffusion,SRID) | 第58-59页 |
| 3.5 BX-35Vca在Vero细胞上的蚀斑 | 第59-60页 |
| 3.6 免疫荧光检测不同时间点BX-35Vca在Vero细胞上的分布 | 第60-61页 |
| 3.7 Western-blot检测证明BX-35Vca的NP蛋白表达比BX-35强早 | 第61页 |
| 3.8 Real-time PCR检测证明BX-35Vca复制能力比BX-35强 | 第61-62页 |
| 3.9 重配病毒BX-35Vc的基因稳定性分析 | 第62页 |
| 3.10 无菌检测结果 | 第62页 |
| 4. 讨论 | 第62-64页 |
| 5. 小结 | 第64页 |
| 第二节 BX-35Vca在BALB/C小鼠的免疫原性及保护效力评价 | 第64-75页 |
| 1. 实验材料 | 第64-65页 |
| 1.1 试验动物 | 第64页 |
| 1.2 病毒 | 第64页 |
| 1.3 细胞 | 第64-65页 |
| 1.4 主要抗体及试剂盒 | 第65页 |
| 1.5 耗材 | 第65页 |
| 1.6 仪器和设备 | 第65页 |
| 2. 实验方法 | 第65-67页 |
| 2.1 病毒感染性滴度测定 | 第65页 |
| 2.2 动物实验 | 第65-67页 |
| 2.3 统计 | 第67页 |
| 3. 实验结果 | 第67-72页 |
| 3.1 BX-35Vca的免疫原性评价 | 第67-68页 |
| 3.2 BX-35Vca免疫小鼠后脾CD4~+、CD8~+细胞的变化及肺sIgA的检测 | 第68-69页 |
| 3.3 攻毒保护实验 | 第69-72页 |
| 3.3.1 致死性攻毒保护实验 | 第69-71页 |
| 3.3.2 致死性攻毒后小鼠上下呼吸道病毒载量的分析 | 第71-72页 |
| 4. 讨论 | 第72-74页 |
| 5. 小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 非论文综述 | 第84-94页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 附录Ⅰ | 第94-99页 |
| 附录Ⅱ 基本实验操作 | 第99-108页 |
| 附录Ⅲ 溶液配置 | 第108-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简介 | 第112-113页 |
