| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-51页 |
| 1.1 流场流分级技术 | 第15-28页 |
| 1.1.1 流场流分级技术发展简史 | 第15-16页 |
| 1.1.2 流场流分级技术原理 | 第16-21页 |
| 1.1.2.1 原理概述 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 对称腔室 | 第17-21页 |
| 1.1.3 流场流分级模式 | 第21-22页 |
| 1.1.3.1 普通模式 | 第21-22页 |
| 1.1.3.2 超多层模式 | 第22页 |
| 1.1.4 非对称流场流分级操作 | 第22-26页 |
| 1.1.4.1 保留时间和分离速度 | 第23页 |
| 1.1.4.2 保留水平和分离度 | 第23页 |
| 1.1.4.3 场流分级方法开发 | 第23-24页 |
| 1.1.4.4 非对称流场流分级的样品聚焦 | 第24-25页 |
| 1.1.4.5 外场流速衰减模型 | 第25-26页 |
| 1.1.5 非对称流场流分级的应用 | 第26-28页 |
| 1.1.5.1 应用概述 | 第26-27页 |
| 1.1.5.2 病毒样颗粒的场流分级 | 第27-28页 |
| 1.2 肝表面抗原病毒样颗粒 | 第28-34页 |
| 1.2.1 肝病毒与乙肝表面抗原 | 第28页 |
| 1.2.1.1 乙肝病毒 | 第28页 |
| 1.2.1.2 肝表面抗原 | 第28页 |
| 1.2.2 肝疫苗 | 第28-34页 |
| 1.2.2.1 血源乙肝疫苗 | 第28-29页 |
| 1.2.2.2 重组乙肝疫苗 | 第29-30页 |
| 1.2.2.3 酵母细胞表达的乙肝疫苗 | 第30-33页 |
| 1.2.2.4 哺乳动物细胞表达的乙肝疫苗 | 第33-34页 |
| 1.3 疫苗大分子的稳定性 | 第34-36页 |
| 1.3.1 蛋白质稳定性的影响因素 | 第34-35页 |
| 1.3.1.1 pH值 | 第34页 |
| 1.3.1.2 温度 | 第34页 |
| 1.3.1.3 盐类 | 第34-35页 |
| 1.3.1.4 蛋白质浓度 | 第35页 |
| 1.3.2 蛋白质结构的变化 | 第35-36页 |
| 1.3.3 小分子添加剂稳定蛋白质的作用机理 | 第36页 |
| 1.3.3.1 优先水化作用 | 第36页 |
| 1.3.3.2 空间位阻作用 | 第36页 |
| 1.4 生物大分子的表征方法 | 第36-45页 |
| 1.4.1 大分子分子量的检测 | 第37页 |
| 1.4.2 大分子颗粒尺寸的检测 | 第37页 |
| 1.4.3 多角度激光散射技术 | 第37-40页 |
| 1.4.3.1 多角度激光散射技术的原理 | 第38-39页 |
| 1.4.3.2 多角度激光散射技术的优势 | 第39-40页 |
| 1.4.3.3 多角度激光散射技术测量蛋白聚集体 | 第40页 |
| 1.4.4 AF4-MALLS在生物大分子表征方面的应用 | 第40-45页 |
| 1.4.4.1 蛋白质 | 第40-41页 |
| 1.4.4.2 多糖 | 第41-43页 |
| 1.4.4.3 病毒样颗粒 | 第43页 |
| 1.4.4.4 脂质体 | 第43-45页 |
| 1.5 Hans-HBsAg和CHO-HBsAg研究进展 | 第45-49页 |
| 1.6 立题依据以及实验设计 | 第49-51页 |
| 第二章 AF4-MALLS表征CHO-HBsAg和Hans-HBsAg | 第51-67页 |
| 2.1 引言 | 第51-52页 |
| 2.2 材料与方法 | 第52-56页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 2.2.3 分析方法 | 第54-56页 |
| 2.2.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第54页 |
| 2.2.3.2 透射电镜样品的制备 | 第54页 |
| 2.2.3.3 场流分级条件的建立 | 第54页 |
| 2.2.3.4 CHO-HBsAg和Hans-HBsAg的AF4-MALLS表征 | 第54-56页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第56-65页 |
| 2.3.1 HBsAg的场流分级参数设计与优化 | 第56-60页 |
| 2.3.2 AF4-MALLS表征HBsAg的可行性分析 | 第60-64页 |
| 2.3.3 AF4-MALLS表征HBsAg的优越性分析 | 第64-65页 |
| 2.4 小结 | 第65-67页 |
| 第三章 溶液环境对CHO-HBsAg和Hans-HBsAg稳定性的研究 | 第67-83页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 材料与方法 | 第68-70页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第68页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 3.2.2.1 盐浓度处理 | 第69页 |
| 3.2.2.2 反复冻融处理 | 第69页 |
| 3.2.2.3 加热处理 | 第69页 |
| 3.2.2.4 抗原活性检测 | 第69页 |
| 3.2.3 分析方法 | 第69-70页 |
| 3.2.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第69页 |
| 3.2.3.2 透射电镜样品的制备 | 第69-70页 |
| 3.2.3.3 抗原活性分析 | 第70页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第70-81页 |
| 3.3.1 硫酸铵对CHO-HBsAg和Hans-HBsAg的影响 | 第70-74页 |
| 3.3.1.1 场流分级分析 | 第70-71页 |
| 3.3.1.2 电镜分析 | 第71-72页 |
| 3.3.1.3 抗原活性变化 | 第72-74页 |
| 3.3.2 反复冻融对CHO-HBsAg和Hans-HBsAg的影响 | 第74-77页 |
| 3.3.2.1 场流分级 | 第74-75页 |
| 3.3.2.2 电镜分析 | 第75页 |
| 3.3.2.3 抗原活性变化 | 第75-77页 |
| 3.3.3 温度对CHO-HBsAg和Hans-HBsAg的影响 | 第77-81页 |
| 3.3.3.1 场流分级 | 第77-78页 |
| 3.3.3.2 电镜分析 | 第78-79页 |
| 3.3.3.3 抗原活性变化 | 第79-81页 |
| 3.4 小结 | 第81-83页 |
| 第四章 Hans-HBsAg在盐溶液中聚集行为的研究 | 第83-103页 |
| 4.1 引言 | 第83页 |
| 4.2 材料与方法 | 第83-86页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第84-85页 |
| 4.2.2.1 NaCl的影响 | 第84页 |
| 4.2.2.2 硫酸铵的影响 | 第84-85页 |
| 4.2.2.3 抗原活性检测 | 第85页 |
| 4.2.3 分析方法 | 第85-86页 |
| 4.2.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第85页 |
| 4.2.3.2 透射电镜样品的制备 | 第85页 |
| 4.2.3.3 分析超速离心 | 第85页 |
| 4.2.3.4 抗原活性分析 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-100页 |
| 4.3.1 NaCl溶液对Hans-HBsAg稳定性的影响 | 第86-91页 |
| 4.3.1.1 不同反应时间对Hans-HBsAg的影响 | 第86-88页 |
| 4.3.1.2 不同NaCl浓度对Hans-HBsAg的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.1.3 正常组装体和寡聚体含量的定量计算 | 第89-90页 |
| 4.3.1.4 透析除盐对聚集可逆性的影响 | 第90-91页 |
| 4.3.2 硫酸铵溶液对Hans-HBsAg稳定性的影响 | 第91-97页 |
| 4.3.2.1 不同反应时间对Hans-HBsAg的影响 | 第91-93页 |
| 4.3.2.2 不同硫酸铵浓度对Hans-HBsAg的影响 | 第93页 |
| 4.3.2.3 正常组装体和寡聚体以及聚集体含量的定量计算 | 第93-96页 |
| 4.3.2.4 透析除盐对聚集可逆性的影响 | 第96-97页 |
| 4.3.2.5 Hans-HBsAg在硫酸铵溶液中的聚集机理 | 第97页 |
| 4.3.3 聚集行为对抗原活性的影响 | 第97-100页 |
| 4.4 小结 | 第100-103页 |
| 第五章 小分子添加剂对HBsAg稳定性的研究 | 第103-117页 |
| 5.1 引言 | 第103页 |
| 5.2 材料与方法 | 第103-106页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第103-104页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第104-105页 |
| 5.2.2.1 脲 | 第104页 |
| 5.2.2.2 盐酸胍 | 第104页 |
| 5.2.2.3 精氨酸 | 第104-105页 |
| 5.2.2.4 聚乙二醇 | 第105页 |
| 5.2.2.5 表面活性剂 | 第105页 |
| 5.2.2.6 抗原活性检测 | 第105页 |
| 5.2.3 分析方法 | 第105-106页 |
| 5.2.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第105页 |
| 5.2.3.2 抗原活性分析 | 第105-106页 |
| 5.2.3.3 荧光光谱分析 | 第106页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第106-114页 |
| 5.3.1 脲的影响 | 第106-107页 |
| 5.3.2 盐酸胍的影响 | 第107-109页 |
| 5.3.3 精氨酸的影响 | 第109-112页 |
| 5.3.4 聚乙二醇的影响 | 第112-113页 |
| 5.3.5 表面活性剂的影响 | 第113-114页 |
| 5.4 小结 | 第114-117页 |
| 第六章 结论与展望 | 第117-121页 |
| 6.1 主要研究结果 | 第117-118页 |
| 6.2 本论文的创新点 | 第118-119页 |
| 6.3 展望 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-133页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
