| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 转基因蛋白质安全评价 | 第10-11页 |
| 1.1.1 转基因安全评价历史 | 第10页 |
| 1.1.2 关于外源蛋白评价方法的讨论 | 第10-11页 |
| 1.1.3 转基因外源蛋白安全评价方法 | 第11页 |
| 1.2 蓖麻毒蛋白简介 | 第11-13页 |
| 1.2.1 蓖麻毒蛋白理化性质 | 第12页 |
| 1.2.2 蓖麻毒蛋白进入细胞方式及毒性机理 | 第12-13页 |
| 1.3 细胞毒性检测 | 第13-15页 |
| 1.4 体外遗传毒性检测常用方法 | 第15-16页 |
| 1.5 细胞凋亡检测方法 | 第16-17页 |
| 1.6 关于凋亡基因、炎症因子、免疫基因 | 第17-18页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第18页 |
| 1.8 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 通过细胞毒性检测、细胞形态、基因表达评价蛋白安全性 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第19页 |
| 2.1.2 蓖麻子蛋白 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂与耗材 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 生物信息学方法分析外源蛋白质毒性 | 第20页 |
| 2.2.2 蓖麻子蛋白提取 | 第20页 |
| 2.2.3 蛋白浓度的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE测蛋白完整度 | 第21页 |
| 2.2.5 细胞复苏与培养 | 第21-22页 |
| 2.2.6 细胞总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.7 RNA纯度和浓度检测 | 第22页 |
| 2.2.8 RNA反转录 | 第22-23页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR（qPCR）检测 | 第23-24页 |
| 2.2.10 细胞增殖-毒性检测实验 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.3.1 蛋白质毒性生物信息学分析结果 | 第24-26页 |
| 2.3.2 蓖麻子蛋白提取结果 | 第26页 |
| 2.3.3 BCA法检测蓖麻子蛋白浓度结果 | 第26-27页 |
| 2.3.4 细胞培养基中添加蛋白浓度摸索 | 第27页 |
| 2.3.5 用CCK-8 试剂检测细胞增殖-毒性评价蛋白安全性 | 第27-28页 |
| 2.3.6 通过细胞形态学观察评价蛋白安全性 | 第28-29页 |
| 2.3.7 通过检测免疫相关基因表达评价蛋白安全性 | 第29-30页 |
| 2.3.8 通过检测凋亡相关基因表达评价蛋白安全性 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 蛋白质对细胞遗传毒性、凋亡作用的研究 | 第32-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 | 第32页 |
| 3.1.3 实验用细胞系和蛋白 | 第32页 |
| 3.1.4 主要试剂溶液的配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 蓖麻子蛋白提取、浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| 3.2.2 细胞复苏与培养 | 第33页 |
| 3.2.3 台盼蓝染色计数及检测细胞存活率 | 第33-34页 |
| 3.2.4 彗星实验检测蓖麻子蛋白对IM-9 细胞DNA损伤 | 第34页 |
| 3.2.5 AO-EB双染试剂盒检测IM-9 细胞的凋亡 | 第34-35页 |
| 3.2.6 流式细胞术检测IM-9 细胞的凋亡 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 彗星实验检测细胞DNA损伤 | 第35-37页 |
| 3.3.2 AO-EB检测凋亡结果 | 第37页 |
| 3.3.3 流式细胞仪检测凋亡结果 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49页 |
