| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-9页 |
| 中英缩略词表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 一、间充质干细胞(MSCs)的临床应用 | 第15-17页 |
| 二、非编码微小RNAs(miRNAs)的作用机制 | 第17-18页 |
| 三、本研究的主要方法和目的 | 第18-19页 |
| 第一部分 筛选与糖尿病足致病相关的候选miRNA | 第19-46页 |
| 1 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 实验所需仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.2 实验主要试剂 | 第22-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 1.2.1 糖尿病足样本入选标准 | 第24-25页 |
| 1.2.2 间充质干细胞分离培养 | 第25页 |
| 1.2.3 细胞传代 | 第25-26页 |
| 1.2.4 细胞冻存 | 第26页 |
| 1.2.5 细胞复苏 | 第26-27页 |
| 1.2.6 间充质干细胞的细胞体外分化 | 第27页 |
| 1.2.7 间充质干细胞的内皮细胞分化潜能 | 第27页 |
| 1.2.8 RNA提取与定量 | 第27-28页 |
| 1.2.9 实时定量PCR分析 | 第28-29页 |
| 1.2.10 microRNA实时定量PCR分析 | 第29-31页 |
| 1.2.11 蛋白提取与定量 | 第31-32页 |
| 1.2.12 蛋白电泳与杂交 | 第32页 |
| 1.2.13 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第32-33页 |
| 1.2.14 流式细胞技术 | 第33页 |
| 1.2.15 miRNA的建库及筛选 | 第33-34页 |
| 1.2.16 VEGF3’UTR-luciferasereporter质粒构建 | 第34页 |
| 1.2.17 as-miR-205-5p与VEGF3’UTR-luciferasereporter质粒共转染 | 第34-35页 |
| 1.2.18 Luciferase活性测定 | 第35页 |
| 1.2.19 油红O染色 | 第35页 |
| 1.2.20 碱性磷酸酶染色(VonKossa法) | 第35-36页 |
| 1.2.21 阿尔辛蓝染色 | 第36页 |
| 1.2.22 统计学方法 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-43页 |
| 2.1 糖尿病足患者溃疡皮肤组织中VEGF表达降低 | 第36-37页 |
| 2.2 间充质干细胞分离、培养和鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3 间充质干细胞的内皮细胞分化潜能 | 第39页 |
| 2.4 间充质干细胞中VEGF被转录后调控 | 第39-40页 |
| 2.5 miR-205-5p介导了间充质干细胞中VEGF的转录后调控 | 第40-41页 |
| 2.6 间充质干细胞中miR-205-5p结合VEGF3’-UTR从而抑制其翻译过程 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-46页 |
| 第二部分 体内、体外实验验证miR-205-5p在糖尿病足中的作用机制 | 第46-71页 |
| 1 材料与方法 | 第48-63页 |
| 1.1 实验材料 | 第48-51页 |
| 1.1.1 实验所需仪器 | 第48-49页 |
| 1.1.2 实验主要试剂 | 第49-51页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第51页 |
| 1.2 实验方法 | 第51-63页 |
| 1.2.1 糖尿病足小鼠模型的建立 | 第51-52页 |
| 1.2.2 实验分组及处理 | 第52页 |
| 1.2.3 体内miRNA-MSCs细胞修饰后移植于糖尿病足小鼠 | 第52页 |
| 1.2.4 间充质干细胞分离培养 | 第52-53页 |
| 1.2.5 细胞传代 | 第53页 |
| 1.2.6 细胞冻存 | 第53-54页 |
| 1.2.7 细胞复苏 | 第54页 |
| 1.2.8 间充质干细胞的细胞体外分化 | 第54页 |
| 1.2.9 miRNA修饰间充质干细胞 | 第54-56页 |
| 1.2.10 流式细胞技术 | 第56页 |
| 1.2.11 RNA提取与定量 | 第56页 |
| 1.2.12 实时定量PCR分析 | 第56-57页 |
| 1.2.13 microRNA实时定量PCR分析 | 第57-59页 |
| 1.2.14 蛋白提取与定量 | 第59-60页 |
| 1.2.15 蛋白电泳与杂交 | 第60-61页 |
| 1.2.16 组织包埋与切片 | 第61页 |
| 1.2.17 免疫荧光 | 第61-62页 |
| 1.2.18 油红O染色 | 第62页 |
| 1.2.19 碱性磷酸酶染色(VonKossa法) | 第62页 |
| 1.2.20 阿尔辛蓝染色 | 第62-63页 |
| 1.2.21 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第63页 |
| 1.2.22 统计学方法 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-67页 |
| 2.1 as-miR-205-5p修饰的间充质干细胞保持原有特性 | 第63-65页 |
| 2.2 移植as-miR-205-5p的间充质干细胞对糖尿病的影响 | 第65-66页 |
| 2.3 as-miR-205-5p增强间充质干细胞对糖尿病足的治疗作用 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 4 小结 | 第70-71页 |
| 结论与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第79-80页 |
| 综述 糖尿病足间充质干细胞治疗的研究进展 | 第80-92页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
