| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 伏马毒素简介 | 第13页 |
| 1.2 伏马毒素的危害 | 第13-15页 |
| 1.2.1 伏马毒素毒性作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2.2 神经毒性 | 第14页 |
| 1.2.3 肺毒性 | 第14页 |
| 1.2.4 致癌性 | 第14-15页 |
| 1.2.5 免疫毒性 | 第15页 |
| 1.3 伏马毒素的污染情况 | 第15-17页 |
| 1.4 伏马毒素的限量标准 | 第17页 |
| 1.5 伏马毒素的削减方法 | 第17-20页 |
| 1.5.1 物理削减法 | 第18-19页 |
| 1.5.2 化学削减法 | 第19页 |
| 1.5.3 生物削减法 | 第19-20页 |
| 1.6 伏马毒素的检测方法 | 第20-22页 |
| 1.6.1 高效液相色谱串联质谱法 | 第20-21页 |
| 1.6.2 高效液相色谱法 | 第21页 |
| 1.6.3 酶联免疫法 | 第21-22页 |
| 1.6.4 薄层层析法 | 第22页 |
| 1.7 原核表达系统 | 第22-23页 |
| 1.7.1 大肠杆菌表达系统 | 第22-23页 |
| 1.7.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第23页 |
| 1.8 技术路线 | 第23-24页 |
| 1.9 研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 伏马毒素降解微生物的筛选与鉴定 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 试剂与酶 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基与溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.1.5 FB_1毒素管制备 | 第27页 |
| 2.1.6 样品来源 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 FB_1检测方法 | 第29页 |
| 2.2.2 样品前处理 | 第29页 |
| 2.2.3 FB_1标准曲线的绘制 | 第29页 |
| 2.2.4 FB_1降解菌的筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.5 FB_1降解菌的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 降解菌株的革兰氏染色 | 第30-31页 |
| 2.2.7 降解菌株的生长特性和降解特性 | 第31页 |
| 2.2.8 降解FB_1活性物质的定位和性质的初步分析 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-35页 |
| 2.3.1 FB_1标准曲线的绘制 | 第32页 |
| 2.3.2 降解菌株的筛选和分离 | 第32-33页 |
| 2.3.3 降解菌株的形态 | 第33页 |
| 2.3.4 降解菌株的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.5 菌株的生长特性和降解特性 | 第34页 |
| 2.3.6 降解FB_1活性物质的定位和性质的初步分析 | 第34-35页 |
| 2.4 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 伏马毒素降解酶基因的克隆及工程菌的构建 | 第37-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第37-38页 |
| 3.1.3 试剂与酶 | 第38页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 引物的设计 | 第38-39页 |
| 3.2.2 目的基因的克隆 | 第39页 |
| 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 3.2.4 目的基因和载体的双酶切及连接 | 第40页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第41页 |
| 3.2.7 大肠阳性克隆的鉴定 | 第41页 |
| 3.2.8 大肠阳性克隆导入E.coli Rosetta(DE3)中 | 第41-42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-44页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第42页 |
| 3.3.2 转化子的挑取及PCR验证 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组质粒的双酶切验证 | 第43页 |
| 3.3.4 转化子测序 | 第43-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 伏马毒素降解酶纯化与Western Blot分析 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 仪器设备 | 第45页 |
| 4.1.2 菌株 | 第45页 |
| 4.1.3 试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.4 培养基与溶液配制 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 4.2.1 降解酶的诱导表达 | 第47-48页 |
| 4.2.2 降解酶的收集 | 第48页 |
| 4.2.3 降解酶的纯化与浓缩 | 第48页 |
| 4.2.4 蛋白预制胶的制作 | 第48-49页 |
| 4.2.5 纯化酶的SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| 4.2.6 纯化酶的Western Blot分析 | 第50-51页 |
| 4.2.7 纯化酶对FB_1降解研究 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-54页 |
| 4.3.1 两种酶的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 4.3.2 YD酶的Western Blot分析 | 第52页 |
| 4.3.3 纯化酶对FB_1降解研究 | 第52-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 伏马毒素FB_1降解产物的质谱解析 | 第55-65页 |
| 5.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 仪器设备 | 第55页 |
| 5.1.2 试剂 | 第55页 |
| 5.1.3 菌株 | 第55页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第55-56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 5.2.1 LC-MS条件 | 第56页 |
| 5.2.2 实验样品前处理 | 第56-57页 |
| 5.2.3 实验样品准备 | 第57-58页 |
| 5.3 实验结果 | 第58-64页 |
| 5.3.1 菌株ASAG22对FB_1降解产物的初步分析 | 第58-60页 |
| 5.3.2 YD酶对FB_1降解产物的初步分析 | 第60-62页 |
| 5.3.3 YI酶和丙酮酸对HFB_1降解产物的初步分析 | 第62-64页 |
| 5.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 个人简历 | 第73页 |
