| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-55页 |
| 1.1 蛋白酶 | 第12-23页 |
| 1.1.1 蛋白酶分类及作用机制 | 第12-15页 |
| 1.1.2 蛋白酶的活性调节 | 第15-21页 |
| 1.1.3 蛋白酶的应用 | 第21-23页 |
| 1.2 嗜热酶 | 第23页 |
| 1.3 极端微生物及嗜热菌 | 第23-26页 |
| 1.4 DJ-1/ThiJ/pfpI超家族简介 | 第26-32页 |
| 1.4.1 DJ-1/ThiJ/pfpI超家族 | 第26-27页 |
| 1.4.2 PfpI肽酶家族 | 第27-32页 |
| 1.5 酶分子改造 | 第32-41页 |
| 1.5.1 酶分子的理性设计 | 第33-35页 |
| 1.5.2 酶分子的非理性设计 | 第35-38页 |
| 1.5.3 酶分子的半理性设计 | 第38-41页 |
| 1.6 立题依据和实验设计 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-55页 |
| 第二章 重组蛋白酶PhpI的性质研究 | 第55-75页 |
| 2.1 引言 | 第55页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第55页 |
| 2.3 实验材料 | 第55-57页 |
| 2.3.1 菌种与质粒 | 第55-56页 |
| 2.3.2 主要试剂 | 第56页 |
| 2.3.3 培养基 | 第56-57页 |
| 2.4 实验方法 | 第57-62页 |
| 2.4.1 超嗜热古菌Pyrococcus horikoshii的培养 | 第57页 |
| 2.4.2 Phpl基因的克隆 | 第57-60页 |
| 2.4.3 重组蛋白的表达 | 第60页 |
| 2.4.4 目的蛋白的提取、纯化及鉴定 | 第60页 |
| 2.4.5 蛋白浓度的测定 | 第60-61页 |
| 2.4.6 蛋白酶活力的测定 | 第61-62页 |
| 2.4.7 生物信息学软件 | 第62页 |
| 2.5 实验结果 | 第62-72页 |
| 2.5.1 基因克隆 | 第62-63页 |
| 2.5.2 蛋白酶的纯化及鉴定 | 第63-64页 |
| 2.5.3 蛋白酶PhpI酶学性质表征 | 第64-72页 |
| 2.6 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第三章 半理性设计提高嗜热蛋白酶PhpI的活力 | 第75-102页 |
| 3.1 引言 | 第75页 |
| 3.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第75-76页 |
| 3.2.2 定点饱和突变库的构建和筛选 | 第76-77页 |
| 3.2.3 野生型与突变体的表达、纯化及鉴定 | 第77-78页 |
| 3.2.4 突变体酶学性质表征 | 第78页 |
| 3.3 实验结果 | 第78-98页 |
| 3.3.1 突变位点的预测 | 第78-86页 |
| 3.3.2 酶标板筛选灵敏性的统计学分析 | 第86-87页 |
| 3.3.3 饱和突变库的构建及筛选 | 第87页 |
| 3.3.4 突变体的纯化与性质鉴定 | 第87-98页 |
| 3.4 讨论 | 第98-100页 |
| 3.5 小结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-102页 |
| 第四章 120位点的探讨 | 第102-132页 |
| 4.1 引言 | 第102页 |
| 4.2 特殊120位点的解析 | 第102-104页 |
| 4.3 实验材料与方法 | 第104-106页 |
| 4.3.1 生物信息学分析 | 第104-105页 |
| 4.3.2 序列和空间结构比对 | 第105页 |
| 4.3.3 突变体的构建 | 第105页 |
| 4.3.4 突变体的纯化和动力学常数测定 | 第105-106页 |
| 4.4 实验结果 | 第106-128页 |
| 4.4.1 序列和结构同源性比对 | 第106-107页 |
| 4.4.2 120位点突变体的动力学 | 第107-108页 |
| 4.4.3 底物分子对接 | 第108-111页 |
| 4.4.4 离子结合位点的预测 | 第111-112页 |
| 4.4.5 别构位点的探讨 | 第112-128页 |
| 4.5 小结 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-132页 |
| 创新点 | 第132-134页 |
| 后续研究展望 | 第134-136页 |
| 攻读博士期间科研成果 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138页 |