| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 拓扑替康减轻LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应 | 第13-20页 |
| 1.1 材料 | 第13-14页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第13页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第13页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第13-14页 |
| 1.2 方法 | 第14-16页 |
| 1.2.1 THP-1细胞培养和诱导分化 | 第14页 |
| 1.2.2 MTT法测定细胞活力 | 第14-15页 |
| 1.2.3 细胞总RNA的提取 | 第15页 |
| 1.2.4 RNA提取并逆转录为cDNA | 第15页 |
| 1.2.5 荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第15-16页 |
| 1.2.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第16页 |
| 1.3 结果 | 第16-19页 |
| 1.3.1 一定浓度范围的拓扑替康对THP-1巨噬细胞无明显毒性作用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 拓扑替康抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子的表达和分泌 | 第17-18页 |
| 1.3.3 拓扑替康抑制ssRNA诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子的表达和释放 | 第18-19页 |
| 1.4 讨论 | 第19-20页 |
| 第二章 拓扑替康减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤 | 第20-25页 |
| 1.1 材料 | 第20页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第20页 |
| 1.1.3 实验试剂与耗材 | 第20页 |
| 1.2 实验方法 | 第20-22页 |
| 1.2.1 LPS诱导C57BL/6小鼠急性肺损伤(ALI)模型的建立 | 第20-21页 |
| 1.2.2 HE染色及肺损伤评分评估小鼠ALI严重程度 | 第21页 |
| 1.2.3 ELISA (eBioscience)检测步骤: | 第21-22页 |
| 1.2.4 BCA法检测肺泡灌洗液(BALF)总蛋白浓度 | 第22页 |
| 1.3 结果 | 第22-23页 |
| 1.3.1 拓扑替康显著减轻LPS诱导的小鼠肺组织炎症、损伤 | 第22-23页 |
| 1.3.2 拓扑替康减轻LPS所致的小鼠BALF蛋白渗出、抑制炎症因子释放 | 第23页 |
| 1.4 讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 拓扑替康通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS诱导的炎症应答 | 第25-35页 |
| 1.1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第25页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第25页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.2 方法 | 第26-30页 |
| 1.2.1 THP-1细胞培养和诱导分化 | 第26页 |
| 1.2.2 Agilent lncRNA芯片 | 第26-27页 |
| 1.2.3 细胞总RNA的提取 | 第27页 |
| 1.2.4 RNA提取并逆转录为cDNA | 第27页 |
| 1.2.5 荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 1.2.6 Western Blot检测蛋白的表达 | 第28-30页 |
| 1.3 结果 | 第30-33页 |
| 1.3.1 Agilent表达谱芯片分析拓扑替康干预LPS刺激THP-1巨噬细胞后的差异表达基因 | 第30-31页 |
| 1.3.2 Real-time PCR验证芯片结果 | 第31页 |
| 1.3.3 拓扑替康对LPS诱导THP-1巨噬细胞NF-κB通路相关蛋白的影响 | 第31-32页 |
| 1.3.4 拓扑替康对ALI小鼠NF-κB通路相关蛋白的影响 | 第32-33页 |
| 1.4 讨论 | 第33-35页 |
| 全文总结 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 附录 | 第41-43页 |
| 中英文缩略词表 | 第41-42页 |
| 试剂配方 | 第42-43页 |
| 作者简介 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
