| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 油菜在生产中的重要地位 | 第12页 |
| 1.2 油菜霜霉病及其危害 | 第12-14页 |
| 1.2.1 油菜的主要病害 | 第13页 |
| 1.2.2 油菜霜霉菌的简介 | 第13页 |
| 1.2.3 油菜霜霉病的病状 | 第13-14页 |
| 1.2.4 油菜霜霉病的防治方法 | 第14页 |
| 1.3 广谱抗病基因RPW8 | 第14-15页 |
| 1.3.1 RPW8的简介 | 第14页 |
| 1.3.2 RPW8的作用机理 | 第14-15页 |
| 1.4 植物抗病基因工程 | 第15-17页 |
| 1.4.1 植物抗病基因工程简介 | 第15-16页 |
| 1.4.2 油菜转基因研究的意义 | 第16页 |
| 1.4.3 油菜常用转基因方法及其优缺点 | 第16-17页 |
| 1.5 农杆菌FLORAL-DIP转基因法 | 第17-18页 |
| 1.5.1 FLORAL-DIP法的简介 | 第17页 |
| 1.5.2 FLORAL-DIP法的优缺点 | 第17-18页 |
| 1.5.3 FLORAL-DIP法的应用前景 | 第18页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 载体 | 第19页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 农杆菌感受态的制备 | 第20页 |
| 2.2.2 冻融法转化农杆菌 | 第20-21页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的FLORAL-DIP遗传转化 | 第21页 |
| 2.2.3.1 油菜种植 | 第21页 |
| 2.2.3.2 转化悬浮液的制备 | 第21页 |
| 2.2.3.3 FLORAL-DIP转化处理 | 第21页 |
| 2.2.4 转化种子T1代的筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.5 转基因植株的PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.2.5.1 转基因植株的DNA提取 | 第22页 |
| 2.2.5.2 转基因植株的PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.6 转基因植株的接种鉴定 | 第23页 |
| 2.2.7 RPW8.1在油菜中的亚细胞定位 | 第23页 |
| 2.2.8 抗病相关基因的表达分析 | 第23-26页 |
| 2.2.8.1 油菜总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.8.2 RNA质量及浓度测定 | 第24页 |
| 2.2.8.3 RNA的反转录 | 第24-25页 |
| 2.2.8.4 RPW8.1基因表达的QRT-PCR检测 | 第25-26页 |
| 2.2.9 TRYPAN BLUE染色 | 第26页 |
| 2.2.10 RPWS.1基因的遗传稳定性分析 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-38页 |
| 3.1 油菜转基因植株的筛选 | 第26-31页 |
| 3.1.1 油菜转化种子T1代的初筛选 | 第26-27页 |
| 3.1.2 转基因植株的PCR检测 | 第27-29页 |
| 3.1.3 浸染次数对转化率的影响 | 第29-31页 |
| 3.2 转基因株系的抗霜霉病鉴定 | 第31-35页 |
| 3.2.1 转基因株系接种鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.2 转基因株系田间抗病鉴定 | 第32-35页 |
| 3.3 RPW8.1基因产物的亚细胞定位 | 第35页 |
| 3.4 转基因植株抗病基因的表达分析 | 第35-36页 |
| 3.4.1 转基因株系中RPW8.1基因的ORT-PCR表达分析 | 第35-36页 |
| 3.5 转基因植株内霜霉菌生长的细胞学观察 | 第36-37页 |
| 3.6 转基因株系RPW8.1基因的遗传分离 | 第37-38页 |
| 4 结论与讨论 | 第38-42页 |
| 4.1 FLORAL-DIP法适用于对甘蓝型油菜的遗传转化 | 第38页 |
| 4.2 转化率与浸染次数呈正相关关系 | 第38-39页 |
| 4.3 接菌后转基因株系间的表型差异明显 | 第39页 |
| 4.4 抗病基因在转基因株系中表达的差异 | 第39-40页 |
| 4.5 油菜霜霉菌在野生型和转基因油菜植株中生长的差异 | 第40页 |
| 4.6 T2代的分离比例符合单基因孟德尔遗传定律 | 第40-41页 |
| 4.7 展望 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
