| 摘要 | 第3-10页 |
| ABSTRACT | 第10-17页 |
| 前言 | 第22-49页 |
| 1.1 前列腺癌的发病现状 | 第22页 |
| 1.2. 前列腺癌“PIN→局限性前列腺癌→转移性前列腺癌”的发病阶段 | 第22-24页 |
| 1.3 雄激素非依赖前列腺癌的发病机制 | 第24-36页 |
| 1.3.1 雄激素受体(AR)与激素非依赖前列腺癌 | 第24-29页 |
| 1.3.1.1 AR与雄激素反应元件 | 第24-25页 |
| 1.3.1.2 AR突变 | 第25-26页 |
| 1.3.1.3 AR表达上调与雄激素敏感性 | 第26页 |
| 1.3.1.4 AR与信号协同激活因子/协同抑制因子 | 第26-28页 |
| 1.3.1.5 激活AR的非经典配体 | 第28-29页 |
| 1.3.2 细胞调节信号通路与雄激素非依赖前列腺癌 | 第29-32页 |
| 1.3.3 炎症因子、生长因子与雄激素非依赖前列腺癌 | 第32页 |
| 1.3.4 前列腺癌干细胞 | 第32-34页 |
| 1.3.5 前列腺中微环境的改变 | 第34页 |
| 1.3.6 潜伏细胞 | 第34页 |
| 1.3.7 上皮-间质的相互作用(EMT) | 第34-35页 |
| 1.3.8 神经内分泌细胞及神经纤维细胞 | 第35-36页 |
| 1.4 miRNA与前列腺癌表达谱研究 | 第36-37页 |
| 1.5 miRNA与前列腺癌的生物学行为 | 第37-38页 |
| 1.6 miRNA与AR信号通路 | 第38-41页 |
| 1.6.1 AR在雄激素敏感过渡到抵抗过程中作用 | 第38-39页 |
| 1.6.2 AR相关的miRNA表达谱研究 | 第39页 |
| 1.6.3 miRNA与前列腺癌AR的反馈调控关系 | 第39-40页 |
| 1.6.4 前列腺癌miRNA-AR信号通路调控网络 | 第40-41页 |
| 1.7 miR-224研究基础及作用机制 | 第41-43页 |
| 1.8 CAMKK2调控许多疾病的病理生物学进程 | 第43-45页 |
| 1.9 CAMKK2与肿瘤的功能及机制研究 | 第45-46页 |
| 1.10 CAMKK2与前列腺癌AR及AMPK信号通路 | 第46-47页 |
| 1.11 课题设想 | 第47-49页 |
| 材料与方法 | 第49-66页 |
| 2.1 材料 | 第49-53页 |
| 2.1.1 组织来源及临床资料 | 第49-51页 |
| 2.1.1.1 组织标本收集 | 第49-50页 |
| 2.1.1.2 病例纳入标准及排除标准 | 第50-51页 |
| 2.1.1.3 临床病理资料及随访 | 第51页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第51页 |
| 2.1.3 实验主要试剂 | 第51-52页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第52-53页 |
| 2.2 方法 | 第53-66页 |
| 2.2.1 细胞及组织miRNA的提取 | 第53-54页 |
| 2.2.2 miRNA荧光定量PCR(QRT-PCR) | 第54-59页 |
| 2.2.2.1 细胞培养 | 第54-55页 |
| 2.2.2.2 DNase消化 | 第55-56页 |
| 2.2.2.3 反转录 | 第56-57页 |
| 2.2.2.4 SYBR Green Ⅰ染料法实时定量荧光PCR(RT-QPCR) | 第57-58页 |
| 2.2.2.5 RT-QPCR产物电泳检测 | 第58页 |
| 2.2.2.6 miR-224基因定量分析 | 第58-59页 |
| 2.2.3 miR-224及CAMKK2载体的构建及细胞的筛选 | 第59-62页 |
| 2.2.3.1 寡核苷酸的合成 | 第59-60页 |
| 2.2.3.2 shDNA模板的退火 | 第60-61页 |
| 2.2.3.3 miR-224载体的构建 | 第61页 |
| 2.2.3.4 细胞转染 | 第61-62页 |
| 2.2.3.5 流式分选 | 第62页 |
| 2.2.4 miR-224靶基因软件预测 | 第62-63页 |
| 2.2.5 荧光素酶报告实验 | 第63页 |
| 2.2.6 免疫印迹实验 | 第63-64页 |
| 2.2.7 细胞增殖实验 | 第64页 |
| 2.2.8 细胞侵袭实验 | 第64页 |
| 2.2.9 细胞划痕实验 | 第64-65页 |
| 2.2.10 细胞周期实验 | 第65页 |
| 2.2.11 统计学处理 | 第65-66页 |
| 结果 | 第66-80页 |
| 3.1 CAMKK2是miR-224的靶基因 | 第66-68页 |
| 3.2 miR-224通过靶向负调控CAMKK2抑制前列腺癌细胞增殖 | 第68-73页 |
| 3.3 前列腺癌miR-224及CAMKK2表达显著负相关 | 第73-75页 |
| 3.4 miR-224及CAMKK2协同表达同前列腺癌临床病理特征相关 | 第75-77页 |
| 3.5 miR-224及CAMKK2协同表达同前列腺癌患者预后密切相关 | 第77-80页 |
| 讨论 | 第80-87页 |
| 4.1 前列腺癌miR-224的功能及靶向调控机制 | 第80-81页 |
| 4.2 前列腺癌CAMKK2-AR信号的交联调控作用 | 第81-83页 |
| 4.3 miR-224与前列腺癌CAMKK2-AR信号通路构成调控网络 | 第83-85页 |
| 4.5 本文揭示的原理 | 第85-87页 |
| 4.5.1 CAMKK2是前列腺癌miR-224的靶基因 | 第85页 |
| 4.5.2 miR-224通过靶向负调控CAMKK2抑制前列腺癌细胞周期及增殖 | 第85页 |
| 4.5.3 miR-224及CAMKK2表达协同参与前列腺癌的发病进程 | 第85-86页 |
| 4.5.4 miR-224及CAMKK2共表达可预测前列腺癌的临床预后 | 第86页 |
| 4.5.5 miR-224可能通过调控CAMKK2-AR通路抑制前列腺癌细胞的增殖及周期 | 第86-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 本研究的不足之处 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-115页 |
| 缩略词表 | 第115-117页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
