| 英文缩略词表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一部分 重组质粒的构建 | 第18-27页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌种、细胞和质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·溶液的配制 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·人GLA cDNA的克隆 | 第19-20页 |
| ·人GLA重组质粒的构建 | 第20-22页 |
| ·实验结果 | 第22-26页 |
| ·人GLA cDNA的克隆 | 第22页 |
| ·人GLA重组质粒的构建 | 第22-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第二部分 阳性克隆的筛选及诱导条件的优化 | 第27-37页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·细胞系 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·溶液的配制 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的转染 | 第28页 |
| ·重组质粒阳性克隆的筛选 | 第28页 |
| ·重组人GLA的诱导表达 | 第28页 |
| ·测定阳性克隆上清中重组人GLA的活性 | 第28-29页 |
| ·重组人GLA的诱导条件的优化 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-35页 |
| ·单克隆细胞的筛选 | 第29-32页 |
| ·4-MUF标准曲线的绘制 | 第32页 |
| ·单克隆细胞GLA活性检测 | 第32-33页 |
| ·重组人GLA诱导条件的优化 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三部分 表达产物的纯化及鉴定 | 第37-45页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·细胞系 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·溶液的配制 | 第37-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·细胞培养 | 第39页 |
| ·培养上清的纯化及浓缩 | 第39-40页 |
| ·重组表达产物的鉴定 | 第40-41页 |
| ·纯化前后蛋白活性比较 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-44页 |
| ·表达产物的纯化 | 第41-42页 |
| ·重组表达产物的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| ·重组表达产物的免疫印迹检测 | 第43页 |
| ·CHO(GLA)和CHO(m-GLA)单克隆纯化前后活性比较 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第四部分 GLA生化性质的研究 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·相对分子量测定 | 第45页 |
| ·最适反应pH | 第45-46页 |
| ·最适反应温度 | 第46页 |
| ·酶反应动力学参数的测定 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-49页 |
| ·相对分子量测定 | 第46-47页 |
| ·最适pH反应 | 第47-48页 |
| ·最适温度反应 | 第48-49页 |
| ·酶反应动力学参数的测定 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 全文总结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 综述 | 第56-69页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |