| 目录 | 第4-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 参考文献 | 第14-21页 |
| 材料与方法 | 第21-45页 |
| 1.实验材料 | 第21-25页 |
| 1.1 工具酶及分子量 Marker | 第21页 |
| 1.2 主要生化试剂及试剂盒 | 第21-23页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第23-24页 |
| 1.4 菌株 | 第24页 |
| 1.5 细胞株 | 第24页 |
| 1.6 质粒载体 | 第24页 |
| 1.7 抗体 | 第24-25页 |
| 1.8 生物分析软件及网站 | 第25页 |
| 2.主要试剂及配制方法 | 第25-28页 |
| 2.1 细胞培养及检测所需试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 细菌培养所需试剂 | 第26页 |
| 2.3 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第26页 |
| 2.4 Western Blot 所用试剂 | 第26-28页 |
| 2.5 HE 染色试剂配制 | 第28页 |
| 3.实验方法 | 第28-45页 |
| 3.1 PCR 反应 | 第28-29页 |
| 3.2 限制性内切酶酶切反应 | 第29页 |
| 3.3 柱离心法回收 DNA 片段 | 第29页 |
| 3.4 DNA 连接反应 | 第29-30页 |
| 3.5 热击法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 3.6 大肠杆菌的转化 | 第30-31页 |
| 3.7 阳性克隆的筛选 | 第31页 |
| 3.8 质粒 DNA 的小量提取 | 第31-32页 |
| 3.9 结肠癌细胞的培养 | 第32页 |
| 3.10 结肠癌细胞总 RNA 的提取 | 第32-33页 |
| 3.11 肿瘤组织的 HE 染色 | 第33页 |
| 3.12 M-MLV(INVITROGEN)合成 cDNA 第一链（反转录） | 第33-34页 |
| 3.13 Real time PCR | 第34-35页 |
| 3.14 蛋白质浓度测定 | 第35-36页 |
| 3.15 Western blot 分析 | 第36-37页 |
| 3.16 脂质体介导的细胞转染 | 第37-38页 |
| 3.17 慢病毒载体的包装 | 第38-39页 |
| 3.18 免疫组化 | 第39-40页 |
| 3.19 Lin28 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.20 免疫荧光 | 第41页 |
| 3.21 细胞核浆蛋白的分离与提取 | 第41-43页 |
| 3.22 肿瘤细胞药敏试验 Cell Titer-Glo 萤光细胞活性检测 | 第43-45页 |
| 结果一 Lin28 在结肠癌细胞和结肠癌组织中的表达 | 第45-49页 |
| 1.Lin28A，Lin28B 在结肠癌细胞系的表达 | 第45页 |
| 2.Lin28A，Lin28B 在结肠癌组织中的表达 | 第45-49页 |
| 2.1 结肠癌组织标本一般资料 | 第45-46页 |
| 2.2 Real-time PCR | 第46-47页 |
| 2.3 Western Blot | 第47页 |
| 2.4 免疫组化 | 第47-49页 |
| 讨论一 | 第49-55页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 结果二 Lin28B 在结肠癌细胞中的表达定位 | 第55-59页 |
| 1.免疫荧光法 | 第55-56页 |
| 2.Western Blot | 第56页 |
| 3.Lin28B-GFP 融合蛋白定位 | 第56-57页 |
| 4.组织中 Lin28B 在胞浆中表达 | 第57-59页 |
| 讨论二 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 结果三 Lin28B-Let-7 调控环路影响化疗敏感性的研究 | 第63-69页 |
| 1.结肠癌细胞中 Lin28B-Let-7 负反馈环路的调节 | 第63-65页 |
| 1.1 结肠癌细胞中 Lin28B 过表达 | 第63-64页 |
| 1.2 结肠癌细胞中 Lin28B 过表达抑制 Let-7 的生成： | 第64页 |
| 1.3 结肠癌细胞中 Let-7 抑制 Lin28B 的表达及功能： | 第64-65页 |
| 2. Let-7 对结肠癌化疗敏感性的实验研究 | 第65-67页 |
| 3.Lin28B 对结肠癌化疗敏感性的实验研究 | 第67-69页 |
| 讨论三 | 第69-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 文献综述 | 第79-103页 |
| 综述一靶向结肠癌肿瘤干细胞的结肠癌治疗研究进展 | 第79-89页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 综述二 Cancer Stem Cells and their potential use in cancer immunotherapy | 第89-103页 |
| References | 第97-103页 |
| 中英文缩略词汇对照 | 第103-105页 |
| 攻读学位期间发表文章、承担课题、参编专著及获得奖励情况 | 第105-107页 |
| 1.发表文章 | 第105页 |
| 2.承担课题 | 第105-106页 |
| 3.参编专著 | 第106页 |
| 4.获得奖励 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
