| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 中英符号缩略词表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 番茄病毒病 | 第11-14页 |
| 1.1.1 番茄病毒病发病状况 | 第11-12页 |
| 1.1.2 番茄花叶病毒（ToMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 番茄病毒病防治的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.1 普通的防治措施抵御番茄病毒病 | 第14-15页 |
| 1.2.2 利用基因工程技术防治番茄病毒病 | 第15-17页 |
| 1.3 RNAi 技术在抗病毒中的应用 | 第17-21页 |
| 1.3.1 RNAi 技术原理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 RNAi 技术的发展 | 第18-19页 |
| 1.3.3 RNAi 特点 | 第19-20页 |
| 1.3.4 RNAi 在植物抗病毒中的研究应用 | 第20-21页 |
| 1.4 课题主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 植物表达载体的构建 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 毒源 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 毒源活化及总 RNA 提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 合成 ToMV 和 CMV 的 cDNA 第一链 | 第23页 |
| 2.2.3 ToMV 和 CMV 部分外壳蛋白序列引物的设计 | 第23-25页 |
| 2.2.5 ToMV 和 CMV 部分外壳蛋白序列的克隆 | 第25-27页 |
| 2.2.6 ToMV 和 CMV 的 RNAi 靶序列的融合 | 第27-29页 |
| 2.2.7 重组质粒 piRDG12-ZF 的构建 | 第29页 |
| 2.2.8 RNAi 表达载体 pBi35STC-cp 的构建 | 第29-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.3.1 RNAi 靶序列的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.2 RNAi 靶序列的融合 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组质粒 piRDG12-ZF 的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 RNAi 表达载体 pBi35STC-cp 的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 烟草的遗传转化与接毒验证 | 第37-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 菌株 | 第37页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 培养基 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞制备 | 第37页 |
| 3.2.2 农杆菌转化—电激转化 | 第37-38页 |
| 3.2.3 西方烟无菌组培苗的培育 | 第38页 |
| 3.2.4 转化烟草的获得 | 第38-39页 |
| 3.2.5 温室盆栽转化的烟草苗 | 第39页 |
| 3.2.6 转化烟草和野生型烟草基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| 3.2.7 人工接毒鉴定转基因烟草抗性 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-49页 |
| 3.3.1 表达载体 pBi35STC-cp 质粒导入农杆菌 GV3101 | 第39-41页 |
| 3.3.2 转 pBi35STC-cp 载体烟草的筛选与分子检测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 西方烟遗传转化效率的分析 | 第42-45页 |
| 3.3.4 转基因烟草人工接毒后抗病毒能力验证 | 第45-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 3.4.1 西方烟叶盘转化率的影响 | 第49页 |
| 3.4.2 三种接毒结果的比较 | 第49-50页 |
| 第四章 番茄的遗传转化与接毒验证 | 第50-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.1.1 菌株 | 第50页 |
| 4.1.2 植物材料 | 第50页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.4 培养基 | 第50页 |
| 4.2 方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 番茄子叶叶盘的转化 | 第50-51页 |
| 4.2.2 转化番茄苗的培育 | 第51-52页 |
| 4.2.3 转 pBi35STC-cp 载体番茄的筛选与分子检测 | 第52页 |
| 4.2.4 人工接毒鉴定转基因番茄的抗性 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-54页 |
| 4.3.1 转化番茄的分子检测结果 | 第52-54页 |
| 4.3.2 转基因番茄抗病性试验结果 | 第54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.1.1 成功构建 RNAi 表达载体 | 第55页 |
| 5.1.2 成功构建烟草转化体系 | 第55页 |
| 5.1.3 初步证明转基因植株抗 ToMV 与 CMV | 第55页 |
| 5.2 讨论 | 第55-57页 |
| 5.2.1 RNAi 双元表达系统的构建 | 第55页 |
| 5.2.2 转基因植株抗病性分析 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录一 核苷酸序列 | 第62-64页 |
| 附录二 主要培养基、溶液配制 | 第64-66页 |
| 附录三 版图及说明 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 导师评阅表 | 第71页 |
