| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 microRNA的概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 microRNA的特点 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物miRNA的生物合成及作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2 miRNA对植物生长发育的影响 | 第14-19页 |
| 1.2.1 miRNA对植物根生长发育的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.2 miRNA对植物叶片生长发育的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.3 miRNA对植物花生长发育的影响 | 第17-18页 |
| 1.2.4 miRNA在与植物激素的调节 | 第18页 |
| 1.2.5 植物miRNA对环境胁迫的应答 | 第18-19页 |
| 1.3 miRNA的研究方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 直接克隆法 | 第19页 |
| 1.3.2 遗传筛选法 | 第19-20页 |
| 1.3.3 生物信息学的方法 | 第20页 |
| 1.3.4 高通量测序 | 第20-21页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第21-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-42页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料和处理 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株及质粒载体 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 常用溶液及培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 相关软件和分析网站 | 第26页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 拟南芥总DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第27-29页 |
| 2.2.3 Cln-miR399a基因的RT-PCR (reverse transcription PCR) | 第29-30页 |
| 2.2.4 Cln-miR399a、PHO2和Unigene56556基因的克隆 | 第30-37页 |
| 2.2.5 农杆菌侵染拟南芥植株及转基因植株Cln-miR399a的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR检测基因的表达量 | 第38-39页 |
| 2.2.7 5RACE验证Cln-mi R399a介导的靶基因切割 | 第39-40页 |
| 2.2.8 烟草瞬时转化 | 第40-41页 |
| 2.2.9 转基因植株Cln-miR399a表型的观察与分析 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果 | 第42-54页 |
| 3.1 杉木miR399a的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.2 目的基因过表达的构建 | 第43-46页 |
| 3.2.1 杉木总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2.2 杉木miR399a前体基因的克隆 | 第43-45页 |
| 3.2.3 靶基因的克隆 | 第45-46页 |
| 3.2.4 过表达Cln-miR399a植株的鉴定 | 第46页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR分析Cln-miR399a及靶基因的表达量 | 第46-49页 |
| 3.3.1 转基因植株中Cln-miR399a表达量的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 Cln-miR399a基因的时空表达特异性 | 第47-48页 |
| 3.3.3 转基因植株中Cln-miR399a对靶基因的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 Cln-miR399a对靶基因的作用 | 第49-50页 |
| 3.4.15，RACE验证Cln-miR399a对同源靶基因的切割位点 | 第49页 |
| 3.4.2 体外验证Cln-miR399a对靶基因的切割作用 | 第49-50页 |
| 3.5 转基因植株表型的观察 | 第50-54页 |
| 3.5.1 转基因植株的根长和叶片结构 | 第50-51页 |
| 3.5.2 转基因植株的花期 | 第51页 |
| 3.5.3 转基因植株的株高 | 第51-52页 |
| 3.5.4 转基因植株的叶片总数 | 第52页 |
| 3.5.5 转基因植株的角果 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 生物信息学分析Cln-miR399a进化上的保守性 | 第54-55页 |
| 4.2 Cln-mi R399a基因在拟南芥中的表达 | 第55页 |
| 4.3 过表达Cln-mi R399a基因能够抑制靶基因PHO2调控其生长发育 | 第55-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第70-71页 |
