| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 布鲁氏菌分子致病机制的研究进展 | 第13-25页 |
| 1 布鲁氏菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| 2 布鲁氏菌毒力因子 | 第14-19页 |
| 2.1 表面分子 | 第14-15页 |
| 2.2 Ⅳ型分泌系统 | 第15-16页 |
| 2.3 密度感应系统 | 第16页 |
| 2.4 二元调控系统 | 第16-17页 |
| 2.5 小调控RNA和热休克蛋白 | 第17-18页 |
| 2.6 磷酸转移酶系统 | 第18页 |
| 2.7 其他转录调节因子 | 第18-19页 |
| 3 布鲁氏菌胞内生存机制的研究 | 第19-22页 |
| 3.1 布鲁氏菌对宿主细胞的侵袭作用 | 第19-20页 |
| 3.2 布鲁氏菌在细胞内的运输 | 第20-21页 |
| 3.3 布鲁氏菌在细胞内的复制 | 第21-22页 |
| 4 布鲁氏菌与细胞自噬 | 第22-25页 |
| 第二章 实验研究 | 第25-89页 |
| 实验一 布鲁氏菌 Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887、BMEI1135基因缺失突变株的构建与生存能力分析 | 第25-57页 |
| 1 材料与方法 | 第26-41页 |
| 1.1 材料 | 第26-27页 |
| 1.2 方法 | 第27-41页 |
| 2 结果 | 第41-54页 |
| 2.1 羊布鲁氏菌强毒株 16M的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2 目的基因N端和C端的PCR扩增 | 第42-44页 |
| 2.3 同源重组序列的融合 | 第44-45页 |
| 2.4 突变株突变载体的构建 | 第45页 |
| 2.5 突变株的筛选和鉴定 | 第45-47页 |
| 2.6 缺失株 16M△DK63-887、16M△BMEI1135的遗传稳定性检测 | 第47-50页 |
| 2.7 生长曲线 | 第50-51页 |
| 2.8 布鲁氏菌在外界应激条件下的生存能力 | 第51-52页 |
| 2.9 布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活能力 | 第52-53页 |
| 2.10 小鼠脾脏CFU计数检测突变株的毒力 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 3.1 本研究中构建布鲁氏菌缺失突变株方法的优点 | 第54页 |
| 3.2 电转化效率的优化 | 第54-55页 |
| 3.3 布鲁氏菌 16M△DK63-887、16M△BMEI1135生存能力的分析 | 第55页 |
| 4 小结 | 第55-57页 |
| 实验二 Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887、BMEI1135基因对布鲁氏菌 16M介导细胞自噬的影响 | 第57-74页 |
| 1 材料与方法 | 第58-64页 |
| 1.1 材料 | 第58-59页 |
| 1.2 方法 | 第59-64页 |
| 2 结果 | 第64-72页 |
| 2.1 透射电镜观察巨噬细胞中的自噬体和溶酶体结构 | 第64-66页 |
| 2.2 荧光倒置显微镜观察GFP-LC3 puncta阳性细胞 | 第66-69页 |
| 2.3 细胞自噬相关蛋白Beclin1和ULK1 m RNA转录水平检测 | 第69-70页 |
| 2.4 细胞自噬相关蛋白Beclin1和ULK1蛋白水平检测 | 第70-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 3.1 自噬的监测手段 | 第72-73页 |
| 3.2 布鲁氏菌与自噬 | 第73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 实验三 Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887、BMEI1135基因对布鲁氏菌 16M逃避细胞内溶酶体融合的影响 | 第74-89页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| 1.1 材料 | 第75-76页 |
| 1.2 方法 | 第76-79页 |
| 2 结果 | 第79-87页 |
| 2.1 GFP-16M、16M△DK63-887、16M△BMEI1135的筛选与鉴定 | 第79-80页 |
| 2.2 观察GFP-16M、GFP-16M△DK63-887、GFP-16M△BMEI1135在细胞内的荧光表达效果 | 第80页 |
| 2.3 GFP-16M、GFP-16M△DK63-887、GFP-16M△BMEI1135侵染巨噬细胞观察其与溶酶体共定位情况 | 第80-82页 |
| 2.4 GFP-16M、GFP-16M△DK63-887、GFP-16M△BMEI1135侵染巨噬细胞观察其与高尔基体共定位情况 | 第82-84页 |
| 2.5 GFP-16M、GFP-16M△DK63-887、GFP-16M△BMEI1135侵染巨噬细胞观察其与内质网共定位情况 | 第84-87页 |
| 3 讨论 | 第87-88页 |
| 3.1 DK63-887、BMEI1135对胞内布鲁氏菌与溶酶体融合的影响 | 第87页 |
| 3.2 DK63-887、BMEI1135对胞内布鲁氏菌与高尔基体融合的影响 | 第87-88页 |
| 3.3 DK63-887、BMEI1135对胞内布鲁氏菌与内质网融合的影响 | 第88页 |
| 4 小结 | 第88-89页 |
| 全文结论 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
| 文章发表情况 | 第103-104页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第104页 |
