| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 糖多孢红霉菌 | 第12-14页 |
| 1.1.1 生物学分类 | 第12页 |
| 1.1.2 菌落与菌丝形态 | 第12页 |
| 1.1.3 次级代谢产物 | 第12-14页 |
| 1.2 链霉菌抗生素合成相关TetR基因的研究现状 | 第14-19页 |
| 1.2.1 多样次级代谢产物及抗生素 | 第14页 |
| 1.2.2 抗生素高产策略 | 第14-15页 |
| 1.2.3 TetR家族调节因子介绍 | 第15-17页 |
| 1.2.4 链霉菌抗生素合成相关TetR基因的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4 研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-29页 |
| 2.1.1 所用引物 | 第21-22页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 培养基与培养条件 | 第23-25页 |
| 2.1.4 缓冲液 | 第25-27页 |
| 2.1.5 DNA工具酶与标记物 | 第27-28页 |
| 2.1.6 仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.2.1 目的DNA的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.2 质粒小量制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 目的DNA的回收 | 第30页 |
| 2.2.4 酶切与连接体系 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 酶切体系 | 第30页 |
| 2.2.4.2 连接体系 | 第30-31页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受细胞的制备与转化 | 第31页 |
| 2.2.5.1 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.5.2 感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.2.6 糖多孢红霉菌基因组的制备 | 第31-33页 |
| 2.2.6.1 少量制备 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 大量制备 | 第32-33页 |
| 2.2.7 糖多孢红霉菌原生质体的制备与转化 | 第33页 |
| 2.2.7.1 原生质体的制备 | 第33页 |
| 2.2.7.2 糖多孢红霉菌原生质体的转化 | 第33页 |
| 2.2.8 红霉素发酵液的萃取 | 第33-34页 |
| 2.2.9 红霉素发酵液的HPLC分析 | 第34页 |
| 2.2.10 蛋白表达纯化与EMSA分析 | 第34-35页 |
| 2.2.10.1 蛋白表达 | 第34页 |
| 2.2.10.2 蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.10.3 EMSA分析 | 第35页 |
| 2.2.11 突变株中目的基因转录水平的检测 | 第35-38页 |
| 2.2.11.1 RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.11.2 DNA的消化 | 第36页 |
| 2.2.11.3 反转录生产cDNA链 | 第36-37页 |
| 2.2.11.4 RT-PCR检测目的基因的表达量 | 第37-38页 |
| 第三章 SACE_7301正调控红霉素合成机理研究 | 第38-47页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 结果与分析 | 第38-47页 |
| 3.2.1 SACE_7301系列菌株的HPLC红霉素产量分析 | 第38-41页 |
| 3.2.1.1 △SACE_7301与A226红霉素产量结果 | 第39-40页 |
| 3.2.1.2 SACE_7301相关菌株6天红霉素产量HPLC分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 SACE_7301正调控红霉素合成机制研究 | 第41-45页 |
| 3.2.2.1 △SACE_7301与A226的生物量比较 | 第41-42页 |
| 3.2.2.2 EMSA分析 | 第42-45页 |
| 3.2.2.3 eryAI、ermE转录水平的检测 | 第45页 |
| 3.2.3 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 SACE_7301提高红霉素产量的应用 | 第47-56页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 结果分析 | 第47-56页 |
| 4.2.1 1-3拷贝数PermE~*-7301整合质粒的构建 | 第47-49页 |
| 4.2.1.1 构建流程 | 第47-48页 |
| 4.2.1.2 重组质粒的PCR及酶切验证 | 第48-49页 |
| 4.2.2 A226/7301、A226/2×7301、A226/3×7301菌株的构建 | 第49-51页 |
| 4.2.2.1 PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.2.2 A226/7301、A226/2×7301、A226/3×7301的红霉素产量分析 | 第50页 |
| 4.2.2.3 A226与A226/1-3×7301中eryAI、ermE、SACE_7301的转录水平检测 | 第50-51页 |
| 4.2.3 pSET152-3×7301发酵过程中的稳定性分析 | 第51-52页 |
| 4.2.4 WB/7301、WB/2×7301、WB/3×7301菌株的构建 | 第52-54页 |
| 4.2.4.1 PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.4.2 WB/7301、WB/2×7301、WB/3×7301 HPLC产量结果 | 第53-54页 |
| 4.2.4.3 WB/3×7301的小试发酵 | 第54页 |
| 4.2.5 小结 | 第54-56页 |
| 第五章 总结与展望 | 第56-58页 |
| 5.1 工作总结 | 第56页 |
| 5.2 研究展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第64页 |
