| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-30页 |
| 1.1 人工核酸酶研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1.1 人工锌指核酸酶和TALEN技术 | 第13-15页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas系统 | 第15-20页 |
| 1.1.3 脱靶效应 | 第20-22页 |
| 1.2 靶基因简介 | 第22-27页 |
| 1.2.1 肌肉生长抑制素 | 第23-24页 |
| 1.2.2 黑色素合成相关基因 | 第24-27页 |
| 1.3 显微注射制备转基因鸡 | 第27-29页 |
| 1.3.1 胚盘显微注射法制备转基因鸡 | 第27-28页 |
| 1.3.2 胚盘显微注射法的存在问题与前景展望 | 第28-29页 |
| 1.4 研究目的意义 | 第29-30页 |
| 第2章 CRISPR/Cas9载体构建及功能验证 | 第30-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第30页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.2.1 靶点的选择 | 第31页 |
| 2.2.2 打靶载体构建方法 | 第31-35页 |
| 2.2.3 报告载体构建方法 | 第35-36页 |
| 2.2.4 CRISPR/Cas9系统活性验证 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9打靶载体构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.2 报告载体构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.3 CRISPR/Cas9核酸酶活性检测 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9系统在鸡细胞中介导的基因编辑 | 第42-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第42页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.4 实验引物 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 CRISPR/Cas9系统载体在DF-1 细胞中的转染与筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.2 检测CRISPR/Cas9系统载体对靶基因的编辑 | 第44-46页 |
| 3.2.3 鸡成纤维细胞的分离 | 第46页 |
| 3.2.4 CRISPR/Cas9系统在成纤维细胞中的转染与筛选 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-51页 |
| 3.3.1 CRISPR/Cas9靶向编辑DF-1 细胞 | 第47-49页 |
| 3.3.2 鸡原代成纤维细胞的形态学观察 | 第49页 |
| 3.3.3 鸡原代成纤维细胞的化学转染 | 第49-50页 |
| 3.3.4 鸡原代成纤维细胞的电穿孔法转染 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-54页 |
| 第4章 鸡胚注射方法的探索与优化 | 第54-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 实验动物和质粒 | 第54页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第54页 |
| 4.1.4 实验引物 | 第54-55页 |
| 4.2 实验步骤 | 第55-57页 |
| 4.2.1 鸡胚胎注射体积的筛选 | 第55-56页 |
| 4.2.2 慢病毒注射鸡胚及检测 | 第56页 |
| 4.2.3 注射CRISPR/Cas9打靶载体质粒及检测 | 第56-57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-60页 |
| 4.3.1 注射体积的筛选 | 第57-58页 |
| 4.3.2 注射慢病毒种蛋的检测 | 第58-59页 |
| 4.3.3 CRISPR/Cas9载体注射鸡胚结果 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第74-76页 |
| 缩略词 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
