| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献研究 | 第15-35页 |
| 1.1 中药地龙的研究概论 | 第15-20页 |
| 1.1.1 地龙活性成分及临床药理作用的研究概况 | 第15-17页 |
| 1.1.2 地龙药材资源及其开发利用现状 | 第17-18页 |
| 1.1.3 地龙药材质量的研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2 蚯蚓重金属富集相关研究概论 | 第20-27页 |
| 1.2.1 蚯蚓重金属耐受和富集特性的研究概况 | 第20-23页 |
| 1.2.2 蚯蚓重金属耐受富集机制的研究动态 | 第23-27页 |
| 1.3 金属硫蛋白的研究概论 | 第27-32页 |
| 1.3.1 金属硫蛋白的基本性质研究 | 第27-29页 |
| 1.3.2 金属硫蛋白转录调控机制研究 | 第29-30页 |
| 1.3.3 金属硫蛋白其他生物学功能研究 | 第30-32页 |
| 1.4 文献研究小结 | 第32-35页 |
| 1.4.1 本项目研究的立题依据 | 第32-33页 |
| 1.4.2 本项目研究的目的和意义 | 第33页 |
| 1.4.3 本项目研究的研究内容及技术路线 | 第33-35页 |
| 第二章 参环毛蚓MT-2重组蛋白重金属镉富集及耐受能力研究 | 第35-42页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第35页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第35页 |
| 2.2.3 配制试剂 | 第35-36页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-38页 |
| 2.3.1 MT-2原核表达及Western Blot验证 | 第36-38页 |
| 2.3.2 MT-2重组蛋白提高重金属镉耐受特性的研究 | 第38页 |
| 2.3.3 MT-2重组蛋白重金属镉富集特性的研究 | 第38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-41页 |
| 2.4.1 表达蛋白SDS-PAGE电泳检测及WESTERN BLOT鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.2 MT-2重组蛋白重金属镉耐受特性的研究 | 第39-40页 |
| 2.4.3 MT-2重组蛋白重金属镉富集特性的研究 | 第40-41页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 参环毛蚓MT-2重组蛋白抗氧化损伤特性的研究 | 第42-47页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第42页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第42页 |
| 3.2.3 配制试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.3.1 MT-2重组蛋白表达形式的确定 | 第43页 |
| 3.3.2 MT-2重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 3.3.3 MT-2重组蛋白的DNA保护实验 | 第43-44页 |
| 3.4 实验结果 | 第44-45页 |
| 3.4.1 MT-2重组蛋白表达形式的确定 | 第44页 |
| 3.4.2 MT-2重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 3.4.3 重组MT-2蛋白DNA保护 | 第45页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 参环毛蚓MT-2基因重金属诱导特性研究 | 第47-57页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47页 |
| 4.2.1 实验样品 | 第47页 |
| 4.2.2 养殖土壤 | 第47页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第47页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-51页 |
| 4.3.1 参环毛蚓内参Actin基因的扩增 | 第47-50页 |
| 4.3.2 镉暴露下参环毛蚓MT-2基因表达水平分析 | 第50-51页 |
| 4.4 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.4.1 内参Actin基因序列的研究 | 第51-53页 |
| 4.4.2 MT-2基因在重金属镉诱导下的表达 | 第53-55页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 4.5.1 Actin内参基因的研究 | 第55-56页 |
| 4.5.2 不同浓度镉对MT-2基因的诱导表达 | 第56-57页 |
| 第五章 参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究 | 第57-70页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料 | 第57页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第57页 |
| 5.2.2 配制试剂 | 第57页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第57页 |
| 5.2.4 实验仪器 | 第57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-62页 |
| 5.3.1 参环毛蚓基因组DNA提取 | 第57-58页 |
| 5.3.2 参环毛蚓MT-2编码区序列扩增 | 第58-59页 |
| 5.3.3 参环毛蚓MT-2基因启动子序列扩增 | 第59-62页 |
| 5.4 实验结果 | 第62-67页 |
| 5.4.1 参环毛蚓基因组DNA的提取质量检测 | 第62-63页 |
| 5.4.2 参环毛蚓MT-2基因编码区序列扩增 | 第63-66页 |
| 5.4.3 参环毛蚓MT-2基因启动子的克隆 | 第66页 |
| 5.4.4 参环毛蚓MT-2基因启动子序列分析 | 第66-67页 |
| 5.5 讨论 | 第67-70页 |
| 5.5.1 MT-2基因编码区的扩增 | 第67-68页 |
| 5.5.2 MT-2基因启动子的克隆 | 第68-70页 |
| 第六章 金属硫蛋白在广地龙平喘作用的研究 | 第70-81页 |
| 6.1 引言 | 第70页 |
| 6.2 实验材料 | 第70-71页 |
| 6.2.1 金属硫蛋白的制备 | 第70页 |
| 6.2.2 实验动物 | 第70页 |
| 6.2.3 实验试剂 | 第70-71页 |
| 6.2.4 配制试剂 | 第71页 |
| 6.2.5 实验仪器 | 第71页 |
| 6.3 实验方法 | 第71-74页 |
| 6.3.1 动物处理 | 第71-72页 |
| 6.3.2 动物一般情况观察 | 第72页 |
| 6.3.3 气道高反应性测试 | 第72页 |
| 6.3.4 支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞计数 | 第72页 |
| 6.3.5 小鼠血清IgE水平的检测 | 第72-73页 |
| 6.3.6 BALF中细胞因子的测定 | 第73-74页 |
| 6.3.7 肺组织病理学检查 | 第74页 |
| 6.3.8 数据处理 | 第74页 |
| 6.4 实验结果 | 第74-79页 |
| 6.4.1 动物一般情况 | 第74页 |
| 6.4.2 小鼠气道阻力值测定结果 | 第74-75页 |
| 6.4.3 支气管肺泡灌洗液中总细胞计数 | 第75-76页 |
| 6.4.4 小鼠血清IgE测定结果 | 第76-77页 |
| 6.4.5 BALF细胞因子的测定结果 | 第77-78页 |
| 6.4.6 肺组织病理学检查 | 第78-79页 |
| 6.5 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第七章 全文总结 | 第81-84页 |
| 7.1 实验总结 | 第81-82页 |
| 7.2 创新之处 | 第82页 |
| 7.3 研究展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 附录 | 第95-102页 |
| 在校期间发表文章 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附件1: 统计学处理合格证明 | 第104页 |
