| 第一部分 结核分枝杆菌亚单位疫苗LT69的构建及其保护效应和免疫记忆特性的研究 | 第3-7页 |
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第二部分 抗持留菌药物筛选与评价 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-15页 |
| 第一部分 结核分枝杆菌亚单位疫苗LT69的构建及其保护效应和免疫记忆特性的研究 | 第15-80页 |
| 第一章 前言 | 第15-24页 |
| 1.1 结核病的疾病负担 | 第15-16页 |
| 1.2 结核病疫苗的研究现状 | 第16-20页 |
| 1.3 结核病疫苗免疫记忆保护机制的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究课题设计 | 第22-24页 |
| 第二章 结核分枝杆菌亚单位疫苗LT69的构建和保护效果评价 | 第24-63页 |
| 2.1 引言 | 第24-25页 |
| 2.2 试验材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 菌株 | 第25页 |
| 2.2.2 质粒 | 第25页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第25页 |
| 2.2.4 主要试验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 酶类 | 第25页 |
| 2.2.4.2 试剂盒类 | 第25-26页 |
| 2.2.4.3 培养基及化学试剂 | 第26页 |
| 2.2.4.4 其他(PCR引物、抗体、抗生素和蛋白抗原等) | 第26页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2.6 试验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.6.1 pET30a(+)-ESAT6-Ag85B-Mtb8.4-MPT64(190-198)-HspX(pET30a-EAMMH)重组载体的构建 | 第27-30页 |
| 2.2.6.2 融合蛋白LT69的表达 | 第30-32页 |
| 2.2.6.3 融合蛋白LT69的纯化 | 第32-36页 |
| 2.2.6.4 结核亚单位疫苗LT69-DDA-PolyI:C (LT69)的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.6.5 结核亚单位疫苗LT69的免疫原性及保护效果检测 | 第37-39页 |
| 2.2.6.6 结核亚单位疫苗LT69加强BCG效应的研究 | 第39-40页 |
| 2.3 结果 | 第40-59页 |
| 2.3.1 重组载体pET30a-EAMMH的构建及鉴定 | 第40-45页 |
| 2.3.1.1 构建重组基因载体pET30a(+)-MPT64_(190-198)-Mtb8.4-HspX (MMH) | 第40-42页 |
| 2.3.1.2 PCR扩增ESAT6-Ag85B(EA)融合基因片段 | 第42-43页 |
| 2.3.1.3 构建重组基因载体pET30a-EAMMH(图2.6) | 第43-45页 |
| 2.3.2 LT69融合蛋白的表达 | 第45-47页 |
| 2.3.3 LT69融合蛋白的纯化 | 第47-53页 |
| 2.3.4 LT69疫苗的免疫原性及保护效果 | 第53-56页 |
| 2.3.5 LT69疫苗加强BCG的效应 | 第56-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-62页 |
| 2.4.1 结核分枝杆菌亚单位疫苗抗原的筛选 | 第59-61页 |
| 2.4.2 结核分枝杆菌亚单位蛋白疫苗LT69的特性 | 第61-62页 |
| 2.5 结论 | 第62-63页 |
| 第三章 结核病亚单位疫苗的免疫记忆特性研究 | 第63-73页 |
| 3.1 引言 | 第63页 |
| 3.2 材料与方法 | 第63-66页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第63页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第64页 |
| 3.2.4 主要方法 | 第64-66页 |
| 3.2.4.1 疫苗LT69的配制 | 第64页 |
| 3.2.4.2 雷帕霉素的配制 | 第64页 |
| 3.2.4.3 不同剂量LT69疫苗免疫小鼠策略 | 第64-65页 |
| 3.2.4.4 结核亚单位疫苗LT69和雷帕霉素的联合免疫策略 | 第65-66页 |
| 3.2.4.5 疫苗激活的免疫记忆性T细胞的检测方法 | 第66页 |
| 3.3 结果 | 第66-69页 |
| 3.3.1 低剂量LT69疫苗比高剂量诱导产生更持久的免疫记忆 | 第66-67页 |
| 3.3.2 低剂量LT69疫苗的长期保护效果强于高剂量疫苗 | 第67页 |
| 3.3.3 雷帕霉素增强LT69疫苗诱导的免疫记忆性T细胞的分泌 | 第67-68页 |
| 3.3.4 雷帕霉素免疫增强LT69疫苗的长期保护效果 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-72页 |
| 3.4.1 疫苗诱导的免疫记忆 | 第69-70页 |
| 3.4.2 影响记忆性T细胞形成的因素 | 第70-71页 |
| 3.4.3 疫苗LT69所诱导的免疫记忆的调控 | 第71-72页 |
| 3.5 结论和展望 | 第72-73页 |
| 参考文献(一) | 第73-80页 |
| 第二部分 抗持留菌药物筛选与评价 | 第80-112页 |
| 第一章 前言 | 第80-82页 |
| 1.1 研究背景 | 第80-81页 |
| 1.2 本研究课题设计 | 第81-82页 |
| 第二章 抗金黄色葡萄球菌持留菌药物的筛选与评价 | 第82-92页 |
| 2.1 引言 | 第82页 |
| 2.2 试验材料与方法 | 第82-84页 |
| 2.2.1 菌株 | 第82页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第82-83页 |
| 2.2.3 FDA-批准的药库和抗生素 | 第83页 |
| 2.2.4 从FDA批准的药库筛选针对金黄色葡萄球菌持留菌的药物 | 第83页 |
| 2.2.5 通过菌落计数比较所筛选药物抗持留菌的活性 | 第83-84页 |
| 2.2.6 在小鼠体内评价tosufloxacin对金黄色葡萄球菌持留菌的杀伤效果 | 第84页 |
| 2.3 实验结果 | 第84-89页 |
| 2.3.1 从FDA批准的药物库中筛选出的抗金黄色葡萄球菌持留菌的药物 | 第84-85页 |
| 2.3.2 通过CFU计数比较所筛选出的6种药物的杀菌效果 | 第85页 |
| 2.3.3 比较Tosufloxacin和其他喹诺酮类药物在体内外抗金黄色葡萄球菌持留菌的效果及化学结构的比较 | 第85-87页 |
| 2.3.4 利福平(rifampin)对tosufloxacin的杀菌作用具有一定的协同作用 | 第87-89页 |
| 2.4 讨论 | 第89-91页 |
| 2.4.1 金黄色葡萄球菌持留菌模型 | 第89-90页 |
| 2.4.2 抗生素tosufloxacin是抗金黄色葡萄球菌持留菌的有效药物 | 第90页 |
| 2.4.3 利福平对tosufloxacin的协同作用 | 第90-91页 |
| 2.5 结论 | 第91-92页 |
| 第三章 抗大肠埃希菌持留菌药物的筛选与评价 | 第92-100页 |
| 3.1 引言 | 第92页 |
| 3.2 试验材料与方法 | 第92-94页 |
| 3.2.1 菌株 | 第92页 |
| 3.2.2 FDA批准的药库和抗生素 | 第92-93页 |
| 3.2.3 从FDA批准的药库筛选针对大肠埃希菌持留菌的药物 | 第93页 |
| 3.2.4 通过菌落计数,比较所筛选药物抗持留菌的活性 | 第93页 |
| 3.2.5 所筛选药物最小抑菌浓度(MIC)的检测 | 第93-94页 |
| 3.3 实验结果 | 第94-97页 |
| 3.3.1 从FDA药库筛选出14种具有抗大肠埃希菌持留菌的药物 | 第94-95页 |
| 3.3.2 Tosufloxacin和colistin具有很强的抗大肠埃希菌持留菌的活性 | 第95-97页 |
| 3.4 讨论 | 第97-98页 |
| 3.4.1 大肠埃希菌持留菌是尿路感染(Urinary track infection,UTIs)反复发作的主要原因 | 第97页 |
| 3.4.2 Tosufloxacin和colistin是抗大肠埃希菌持留菌的有效药物 | 第97-98页 |
| 3.5 结论 | 第98-100页 |
| 第四章 协同吡嗪酰胺抗结核分枝杆菌持留菌药物的筛选 | 第100-108页 |
| 4.1 引言 | 第100页 |
| 4.2 试验材料与方法 | 第100-101页 |
| 4.2.1 菌株 | 第100页 |
| 4.2.2 FDA批准的药库和抗生素 | 第100-101页 |
| 4.2.3 筛选抗结核分枝杆菌H37Ra持留菌的药物 | 第101页 |
| 4.3 实验结果 | 第101-106页 |
| 4.3.1 在FDA批准的药物库中筛选出130种药物具有抗H37Ra持留菌的作用 | 第101-105页 |
| 4.3.2 在130种初筛的药物中,有6中具有协同PZA抗H37Ra持留菌的作用 | 第105-106页 |
| 4.4 讨论 | 第106-107页 |
| 4.4.1 结核分枝杆菌持留菌是结核病难于治愈的原因之一 | 第106页 |
| 4.4.2 抗结核分枝杆菌持留菌药物的筛选 | 第106-107页 |
| 4.5 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献(二) | 第108-112页 |
| 在学期间科研成果 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
