| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 低温胁迫对鱼类鳃细胞凋亡的影响 | 第10-16页 |
| 1.1.1 鳃细胞凋亡与鱼类低温耐受性的关系 | 第10-13页 |
| 1.1.2 bmp10研究现状 | 第13-14页 |
| 1.1.3 dusp1研究现状 | 第14-16页 |
| 1.2 细胞凋亡研究 | 第16-17页 |
| 1.2.1 细胞凋亡特点 | 第16页 |
| 1.2.2 细胞凋亡分子机制 | 第16-17页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因敲除技术 | 第17-19页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统发展史 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统结构 | 第18页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9作用机制 | 第18-19页 |
| 1.4 RNA干扰技术 | 第19-20页 |
| 第二章 敲除bmp10,dusp1对斑马鱼鳃细胞凋亡作用研究 | 第20-43页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.2.1 斑马鱼 | 第20-21页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.3 生物信息学分析bmp10,dusp1序列 | 第22-23页 |
| 2.2.4 使用CRISPR/Cas9系统分别敲除bmp10,dusp1 | 第23-29页 |
| 2.2.5 斑马鱼胚胎显微注射 | 第29-30页 |
| 2.2.6 筛选bmp10,dusp1突变型斑马鱼 | 第30-32页 |
| 2.2.7 组织包埋心脏和鳃组织 | 第32-33页 |
| 2.2.8 TUNEL凋亡检测 | 第33-34页 |
| 2.2.9 低温处理斑马鱼 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-41页 |
| 2.3.1 bmp10，dusp1 gRNA靶基因和Cas9 RNA的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 F0代胚胎检测 | 第35-36页 |
| 2.3.3 筛选并检测F1代杂合突变体 | 第36-37页 |
| 2.3.4 F2代纯合子筛选，检测和表型观察 | 第37-38页 |
| 2.3.5 bmp10-/-,dusp1-/-突变纯合子斑马鱼鳃凋亡检测 | 第38-40页 |
| 2.3.6 检测斑马鱼心脏和鳃病理变化 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 Dusp1敲降对低温诱导斑马鱼ZF4细胞凋亡的作用 | 第43-52页 |
| 3.1 前言 | 第43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 细胞 | 第43-44页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 | 第44页 |
| 3.2.3 特异性shRNA序列设计 | 第44-45页 |
| 3.2.4 慢病毒干扰载体构建 | 第45页 |
| 3.2.5 转染，感染，细胞低温处理 | 第45页 |
| 3.2.6 RT-PCR敲降率 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.3.1 pLKO.1-dusp1重组质粒检测 | 第46-47页 |
| 3.3.2 dusp1的敲降及检测 | 第47-49页 |
| 3.3.3 细胞凋亡情况检测 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
