| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-19页 |
| 第二章 实验原理 | 第19-23页 |
| 2.1 采用RNAi机制沉默基因的原理 | 第19页 |
| 2.2 质粒扩增 | 第19-20页 |
| 2.3 分子克隆技术 | 第20页 |
| 2.4 聚合酶链反应(PCR) | 第20-21页 |
| 2.5 慢病毒载体 | 第21-23页 |
| 第三章 实验材料 | 第23-28页 |
| 3.1 主要材料 | 第23页 |
| 3.2 主要试剂配制 | 第23-26页 |
| 3.2.1 LB液体、固体细菌培养基的配制 | 第23-24页 |
| 3.2.2 1×TAE电泳缓冲液 | 第24页 |
| 3.2.3 溴乙锭(EP)的配制 | 第24页 |
| 3.2.4 1%琼脂糖电泳胶的配制 | 第24-25页 |
| 3.2.5 氨苄青霉素配制 | 第25页 |
| 3.2.6 0.1mol/LCaCL2的配制 | 第25页 |
| 3.2.7 6×Loading Buffer配制 | 第25页 |
| 3.2.8 0.25%胰酶的配制 | 第25页 |
| 3.2.9 PBS缓冲液的配制 | 第25页 |
| 3.2.10 Puromycin的配制 | 第25-26页 |
| 3.2.11 DMEM高糖型细胞培养基配制 | 第26页 |
| 3.2.12 Polybrene的配制 | 第26页 |
| 3.2.13 MTT的配制 | 第26页 |
| 3.3 主要仪器与器材 | 第26-28页 |
| 第四章 实验方法 | 第28-36页 |
| 4.1 引物设计、合成及退火 | 第28-29页 |
| 4.1.1 引物设计、合成 | 第28-29页 |
| 4.1.2 引物退火 | 第29页 |
| 4.2 pLKO.1-puro质粒的扩增、提取与双酶切 | 第29-32页 |
| 4.2.1 pLKO.1-puro质粒的扩增 | 第29-30页 |
| 4.2.2 pLKO.1-puro质粒的提取 | 第30-31页 |
| 4.2.3 pLKO.1质粒的双酶切 | 第31页 |
| 4.2.4 pLKO.1质粒的纯化 | 第31-32页 |
| 4.3 目的片段与pLKO.1质粒的连接 | 第32页 |
| 4.4 重组质粒的转化、阳性克隆的筛选及PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 4.4.1 重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| 4.4.2 阳性克隆的筛选及PCR鉴定 | 第33页 |
| 4.5 重组慢病毒质粒的扩增及测序鉴定 | 第33-34页 |
| 4.5.1 重组慢病毒质粒的扩增 | 第33页 |
| 4.5.2 重组慢病毒质粒的提取及测序鉴定 | 第33-34页 |
| 4.6 重组慢病毒质粒SOCS3-pLKO.1-Puro的提纯并去除内毒素 | 第34-36页 |
| 第五章 实验结果 | 第36-39页 |
| 5.1 质粒pLKO.1的提取及验证 | 第36页 |
| 5.2 质粒pLKO.1的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 5.3 重组质粒菌落PCR鉴定结果 | 第37页 |
| 5.4 序列测定及比对 | 第37-39页 |
| 第六章 讨论 | 第39-42页 |
| 第七章 结论 | 第42-43页 |
| 7.1 主要结论 | 第42页 |
| 7.2 局限性 | 第42页 |
| 7.3 展望 | 第42-43页 |
| 中英文对照词 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 研究成果 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
