| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 乳酸的理化性质、应用及研究前景 | 第12-14页 |
| 1.1.1 乳酸的理化性质 | 第12页 |
| 1.1.2 D-乳酸的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.3 D-乳酸的研究前景 | 第13-14页 |
| 1.2 D-乳酸的生产制备 | 第14页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第14页 |
| 1.2.2 酶合成法 | 第14页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第14页 |
| 1.3 D-乳酸的发酵类型和发酵菌株 | 第14-18页 |
| 1.3.1 D-乳酸的发酵类型 | 第15-16页 |
| 1.3.1.1 同型乳酸发酵 | 第15页 |
| 1.3.1.2 异型乳酸发酵 | 第15-16页 |
| 1.3.1.3. 混合酸发酵 | 第16页 |
| 1.3.1.4 双岐发酵 | 第16页 |
| 1.3.2 D-乳酸发酵菌株 | 第16-18页 |
| 1.3.2.1 乳酸细菌 | 第16-17页 |
| 1.3.2.2 芽胞乳杆菌 | 第17页 |
| 1.3.2.3 酿酒酵母 | 第17页 |
| 1.3.2.4 大肠杆菌 | 第17-18页 |
| 1.3.2.5 其他菌株 | 第18页 |
| 1.4 大肠杆菌PTS系统及分解代谢物阻遏效应 | 第18-20页 |
| 1.4.1 大肠杆菌PTS系统 | 第18-19页 |
| 1.4.2 大肠杆菌的葡萄糖效应 | 第19页 |
| 1.4.3 EIIAGlc与分解代谢物阻遏 | 第19-20页 |
| 1.5 本论文研究意义 | 第20-21页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 葡萄糖转运系统mglB和galP基因的敲除 | 第22-37页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.2.1 菌种及质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 引物 | 第23-25页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 培养基 | 第26页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3.1 大肠杆菌工程菌E.coli JH17的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.1.1 大肠杆菌工程菌E.coli JH15感受态的制备 | 第27页 |
| 2.3.1.2 质粒的提取及转入 | 第27-28页 |
| 2.3.1.3 JH17菌株的构建 | 第28页 |
| 2.3.2 大肠杆菌工程菌E.coli JH18的构建 | 第28-31页 |
| 2.3.2.1 mglB基因敲除片段的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 mglB基因PCR产物鉴定及纯化 | 第29页 |
| 2.3.2.3 E.coli mglB基因的敲除 | 第29-30页 |
| 2.3.2.4 重组菌株E.coli JH18的验证 | 第30-31页 |
| 2.3.3 大肠杆菌工程菌E.coli JH20的构建 | 第31页 |
| 2.3.4 无氧管培养 | 第31页 |
| 2.3.5 发酵罐发酵培养 | 第31页 |
| 2.3.6 发酵产物检测与分析 | 第31-32页 |
| 2.3.6.1 菌体浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.3.6.2 高效液相色谱法测定糖类和有机酸 | 第32页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.4.0 mglB、galP基因的简介 | 第32页 |
| 2.4.1 RED敲除体系中相关质粒的简介 | 第32-33页 |
| 2.4.2 验证JH17卡那霉素基因位点的消除 | 第33-34页 |
| 2.4.3 验证JH18 mglB基因的敲除 | 第34页 |
| 2.4.4 验证JH19卡那霉素基因位点的消除 | 第34-35页 |
| 2.4.5 验证JH20 galP基因的敲除 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 利用单糖和混合糖发酵产D-乳酸的研究对比 | 第37-49页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 菌株 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.3.1 制备种子 | 第38页 |
| 3.3.2 利用 10%葡萄糖发酵能力研究 | 第38页 |
| 3.3.3 利用 10%木糖发酵能力研究 | 第38页 |
| 3.3.4 利用 5%葡萄糖和 5%木糖的混合碳源发酵能力研究 | 第38-39页 |
| 3.3.5 发酵产物检测及分析 | 第39页 |
| 3.4 实验结果和分析 | 第39-48页 |
| 3.4.1 利用 10%葡萄糖发酵的对比 | 第39-42页 |
| 3.4.1.1 糖耗情况对比 | 第39-40页 |
| 3.4.1.2 乳酸产量对比 | 第40-41页 |
| 3.4.1.3 总结 | 第41-42页 |
| 3.4.2 利用 10%木糖发酵的对比 | 第42-44页 |
| 3.4.2.1 糖耗情况对比 | 第42页 |
| 3.4.2.2 乳酸产量对比 | 第42-43页 |
| 3.4.2.3 总结 | 第43-44页 |
| 3.4.3 利用 5%葡萄糖和 5%木糖的混合碳源发酵的对比 | 第44-48页 |
| 3.4.3.1 混合糖中葡萄糖消耗情况对比 | 第44页 |
| 3.4.3.2 混合糖中木糖消耗情况对比 | 第44-45页 |
| 3.4.3.3 混合糖中乳酸产量对比 | 第45-46页 |
| 3.4.3.4 菌体生长情况对比 | 第46-47页 |
| 3.4.3.5 总结 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 JH15和JH18利用低混合糖和高混合糖发酵产D-乳酸的差异 | 第49-57页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 菌株 | 第49-50页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第50页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50页 |
| 4.3.1 制备种子 | 第50页 |
| 4.3.2 利用 1%葡萄糖和 1%木糖发酵能力的研究 | 第50页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.4.1 对比JH15和JH18在 1%葡萄糖和 1%木糖环境中发酵情况 | 第50-54页 |
| 4.4.1.1 葡萄糖糖耗情况对比 | 第50-51页 |
| 4.4.1.2 木糖糖耗情况对比 | 第51-52页 |
| 4.4.1.3 乳酸产量和菌体生长情况对比 | 第52-54页 |
| 4.4.1.4 总结 | 第54页 |
| 4.4.2 对比JH18在 1%葡萄糖和 1%木糖环境中和在 5%葡萄糖和 5%木糖环境中发酵情况 | 第54-55页 |
| 4.4.3 对比JH15在 1%葡萄糖和 1%木糖环境中和在 5%葡萄糖和%5%木糖环境中发酵情况 | 第55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-57页 |
| 第5章 总结与展望 | 第57-60页 |
| 5.1 结论 | 第57-58页 |
| 5.2 创新点 | 第58页 |
| 5.3 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
