| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 双生病毒的研究进展 | 第11-20页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·双生病毒的基因组结构 | 第11-14页 |
| ·双生病毒的复制和转录 | 第14-16页 |
| ·双生病毒的移动 | 第16-19页 |
| ·双生病毒的致病因子 | 第19-20页 |
| 2 病毒诱导的基因沉默技术在植物基因功能研究方面的应用 | 第20-22页 |
| 3 立体依据 | 第22-24页 |
| 第二章 RaMoV 核穿梭蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第24-33页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·病毒、菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-28页 |
| ·RaMoV BV1 基因的克隆及其原核表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE 及其Western blotting | 第26-27页 |
| ·NSP 抗血清的制备 | 第27-28页 |
| ·多克隆抗体效价的检测 | 第28页 |
| ·多克隆抗体的特异性检测 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-31页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| ·RaMoV NSP 的原核表达 | 第29-30页 |
| ·多克隆抗体效价的ELISA 检测结果及其特异性分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 RaMoV 症状决定因子的研究 | 第33-47页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·病毒和供试植物 | 第33页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·基因的克隆及其PVX 异源表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-39页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第35-36页 |
| ·RNA 的提取、RT-PCR 和Northern blotting | 第36-39页 |
| ·植物可溶性蛋白的提取及其Western blotting | 第39页 |
| 3 结果和分析 | 第39-44页 |
| ·RaMoV 基因的克隆与分析及其PVX 异源表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·RaMoV 编码的AV2 蛋白和BV1 蛋白为症状决定因子 | 第41-42页 |
| ·RaMoV 编码的BV1 蛋白在本氏烟叶片中的表达及其定位 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 RaMoV BV1 编码的蛋白与本氏烟 RBCS1 的互作研究 | 第47-62页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| 2. 试验方法 | 第48-52页 |
| ·载体构建及其转化 | 第48页 |
| ·重组质粒转化酵母菌 | 第48-49页 |
| ·病毒诱导的基因沉默技术 | 第49-50页 |
| ·Real time PCR 检测植株 RBCS1 沉默水平 | 第50页 |
| ·DNA 的提取和Southern blotting | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-59页 |
| ·本氏烟RBC51 全长基因的克隆及其载体构建 | 第52-53页 |
| ·酵母双杂交鉴定RBCS1 与BV1 编码蛋白的互作 | 第53-54页 |
| ·双分子荧光鉴定RBCS1 与RaMoV BV1 蛋白的互作 | 第54-55页 |
| ·pTRV诱导的本氏烟 RBC51 沉默水平分析及其RaMoV侵染本氏烟情况分析 | 第55-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录Ⅰ常用试剂及其缓冲液的配置 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
