| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第15-31页 |
| 1.1 蛋白质谷氨酰胺酶 | 第15-22页 |
| 1.1.1 蛋白质谷氨酰胺酶简介 | 第16-17页 |
| 1.1.2 蛋白质谷氨酰胺酶的应用 | 第17-20页 |
| 1.1.3 蛋白质谷氨酰胺酶的生产方法 | 第20-22页 |
| 1.2 原生质体融合技术 | 第22-27页 |
| 1.2.1 原生质体的制备 | 第22-23页 |
| 1.2.2 原生质体的融合 | 第23-24页 |
| 1.2.3 原生质体的观察 | 第24-26页 |
| 1.2.4 原生质体融合子的筛选 | 第26-27页 |
| 1.3 本课题的研究背景、目的意义与主要内容 | 第27-31页 |
| 第二章 原生质体融合出发菌株的确定 | 第31-47页 |
| 2.1 前言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-35页 |
| 2.2.1 菌株 | 第31页 |
| 2.2.2 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实验溶液 | 第32-33页 |
| 2.2.4 实验药品 | 第33-34页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第34页 |
| 2.2.6 蛋白质谷氨酰胺酶测序引物 | 第34-35页 |
| 2.2.7 生物信息软件 | 第35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第35页 |
| 2.3.2 菌种保存方法 | 第35页 |
| 2.3.3 模板DNA制备 | 第35页 |
| 2.3.4 核糖体分型 | 第35-36页 |
| 2.3.5 产蛋白质谷氨酰胺酶菌株产酶能力测定 | 第36页 |
| 2.3.6 菌株产生的蛋白质谷氨酰胺酶序列测定 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.4.1 菌株来源分析 | 第37-40页 |
| 2.4.2 33株解朊金黄杆菌全自动核糖体分型分析 | 第40-42页 |
| 2.4.3 33株产蛋白质谷氨酰胺酶解朊金黄杆菌产酶能力测定 | 第42-43页 |
| 2.4.4 菌株产生的蛋白质谷氨酰胺酶序列测定 | 第43-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 原生质体制备及融合条件优化 | 第47-71页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.2.1 菌株 | 第47页 |
| 3.2.2 培养基 | 第47页 |
| 3.2.3 实验溶液 | 第47-48页 |
| 3.2.4 实验药品 | 第48-49页 |
| 3.2.5 实验仪器 | 第49-50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-56页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第50页 |
| 3.3.2 原生质体的制备与再生条件优化 | 第50-53页 |
| 3.3.3 原生质体灭活条件优化 | 第53-54页 |
| 3.3.4 原生质体融合条件优化 | 第54-55页 |
| 3.3.5 原生质体显微镜观察 | 第55-56页 |
| 3.4 结果与分析 | 第56-69页 |
| 3.4.1 原生质体的制备与再生条件优化 | 第56-63页 |
| 3.4.2 原生质体灭活条件优化 | 第63-64页 |
| 3.4.3 原生质体融合条件优化 | 第64-67页 |
| 3.4.4 原生质体显微镜观察 | 第67-69页 |
| 3.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 多轮递推式原生质体融合选育高产菌株 | 第71-89页 |
| 4.1 前言 | 第71页 |
| 4.2 实验材料 | 第71-75页 |
| 4.2.1 菌株 | 第71页 |
| 4.2.2 培养基 | 第71页 |
| 4.2.3 实验溶液 | 第71-73页 |
| 4.2.4 实验药品 | 第73-74页 |
| 4.2.5 实验仪器 | 第74-75页 |
| 4.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 4.3.1 原生质体制备及融合 | 第75页 |
| 4.3.2 48孔板初筛 | 第75-76页 |
| 4.3.3 48孔板复筛 | 第76页 |
| 4.3.4 试管复筛 | 第76页 |
| 4.3.5 摇瓶复筛 | 第76页 |
| 4.3.6 菌株保存 | 第76页 |
| 4.3.7 多轮递推式融合 | 第76-77页 |
| 4.3.8 高产菌株遗传稳定性 | 第77页 |
| 4.4 结果与分析 | 第77-86页 |
| 4.4.1 第一轮原生质体融合 | 第77-79页 |
| 4.4.2 第二轮原生质体融合 | 第79-81页 |
| 4.4.3 第三轮原生质体融合 | 第81-83页 |
| 4.4.4 第四轮原生质体融合 | 第83-84页 |
| 4.4.5 原生质体融合筛选统计 | 第84-86页 |
| 4.4.6 高产菌株遗传稳定性 | 第86页 |
| 4.5 本章小结 | 第86-89页 |
| 第五章 高产菌株性质分析 | 第89-112页 |
| 5.1 前言 | 第89页 |
| 5.2 实验材料 | 第89-92页 |
| 5.2.1 菌株 | 第89页 |
| 5.2.2 培养基 | 第89页 |
| 5.2.3 实验溶液 | 第89-90页 |
| 5.2.4 实验药品 | 第90-91页 |
| 5.2.5 实验仪器 | 第91-92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92-95页 |
| 5.3.1 生长产酶曲线测定 | 第92页 |
| 5.3.2 高产菌株碳源、氮源利用情况分析 | 第92-93页 |
| 5.3.3 结合乳糖自诱导培养基的优化 | 第93-94页 |
| 5.3.4 发酵培养基补加优化 | 第94页 |
| 5.3.5 重测序生物信息学分析 | 第94-95页 |
| 5.4 结果与分析 | 第95-110页 |
| 5.4.1 高产菌株与出发菌株生长产酶曲线 | 第95-97页 |
| 5.4.2 高产菌株碳源、氮源利用情况分析 | 第97-100页 |
| 5.4.3 结合乳糖自诱导培养基的优化 | 第100-101页 |
| 5.4.4 发酵培养基补加优化 | 第101-104页 |
| 5.4.5 重测序生物信息学分析 | 第104-110页 |
| 5.5 本章小结 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 附件 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |