| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 综述 | 第14-25页 |
| 1.1 转基因安全性 | 第14-16页 |
| 1.1.1 最小化基因盒 | 第14-16页 |
| 1.2 原位转化与方法 | 第16-17页 |
| 1.3 植物对除草剂耐性机制 | 第17-23页 |
| 1.3.1 草甘膦与莽草酸合成途径 | 第18-20页 |
| 1.3.2 靶位点基因扩增产生的拷贝数变异 | 第20-22页 |
| 1.3.3 氨基酸突变 | 第22-23页 |
| 1.3.4 草甘膦分子移位与隔离 | 第23页 |
| 1.3.5 代谢耐性基因与交叉耐性 | 第23页 |
| 1.4 除草剂生物学测定 | 第23-24页 |
| 1.5 除草剂安全剂 | 第24-25页 |
| 第2章 大豆草甘膦耐性鉴定与机制分析 | 第25-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 实验试剂与配置方法 | 第26页 |
| 2.1.3 大豆对草甘膦耐性鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.4 核心种质大豆耐性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1.5 草甘膦药害修复实验 | 第28页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.2.1 中黄56大豆的IC50值 | 第28-31页 |
| 2.2.2 核心种质中不同品种大豆具有不同的IC50值 | 第31-32页 |
| 2.2.3 色氨酸是耐草甘膦转基因大豆一种潜在的安全剂 | 第32-35页 |
| 2.2.4 栽培大豆未能发现有效的草甘膦药害恢复剂 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-42页 |
| 2.3.1 大豆下胚轴钩状弯曲作为点施处理部位的生物学与实践意义 | 第36-38页 |
| 2.3.2 大豆草甘膦耐性机制 | 第38-40页 |
| 2.3.3 草甘膦耐性机制研究模型的建立 | 第40-41页 |
| 2.3.4 可用作转基因大豆安全剂的草甘膦药害修复试剂 | 第41-42页 |
| 2.4 小结 | 第42-43页 |
| 第3章 大豆子房原位转化优化 | 第43-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 菌株与质粒载体 | 第43页 |
| 3.1.2 大豆材料 | 第43-44页 |
| 3.1.3 转化DNA分子的优化实验 | 第44-45页 |
| 3.1.4 影响转化花朵选择的因素调查 | 第45-46页 |
| 3.2 实验结果 | 第46-55页 |
| 3.2.1 不同类型T-DNA边界序列、不同基础结构的最小化基因盒 | 第46-47页 |
| 3.2.2 转染级提取试剂盒更有利于获得大量高纯度质粒 | 第47-48页 |
| 3.2.3 Phusion热启动扩增体系可以提高扩增产物特异性 | 第48-50页 |
| 3.2.4 两种回收方式真实性不同 | 第50页 |
| 3.2.5 两种最小化基因盒子房原位转化统计结果 | 第50-51页 |
| 3.2.6 不同材料的节间距与主茎荚数分布不同 | 第51-52页 |
| 3.2.7 不同播期以及每日不同时段转化影响结荚 | 第52-53页 |
| 3.2.8 不同转化元件影响转化结荚 | 第53-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-63页 |
| 3.3.1 高质量转化DNA分子制备是子房原位转化的基础工作 | 第56-57页 |
| 3.3.2 转化花朵优选方案的建立反映了田间花朵开放群体性、复杂性 | 第57-59页 |
| 3.3.3 转化花朵的结荚率是子房原位转化研究的重要指标 | 第59-61页 |
| 3.3.4 转化结荚率与品种结荚率的关系 | 第61-62页 |
| 3.3.5 “植物工厂”与大豆功能基因组学研究 | 第62-63页 |
| 3.4 小结 | 第63-64页 |
| 第4章 转基因大豆的分子与表型鉴定 | 第64-76页 |
| 4.1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 4.1.1 植物材料以及转基因世代命名 | 第64-65页 |
| 4.1.2 转化T_0材料草甘膦喷施鉴定与PCR鉴定体系建立 | 第65-66页 |
| 4.1.3 转基因T_1种子的南繁育种与草甘膦喷施鉴定 | 第66页 |
| 4.1.4 转基因T_1 PCR鉴定 | 第66页 |
| 4.1.5 转基因T2株系的草甘膦喷施鉴定 | 第66页 |
| 4.1.6 转基因T2株系PCR分子鉴定与后代遗传学分析 | 第66页 |
| 4.1.7 转基因大豆T3代大豆草甘膦点施处理 | 第66-67页 |
| 4.2 实验结果 | 第67-74页 |
| 4.2.1 转基因PCR鉴定体系优化 | 第67-68页 |
| 4.2.2 草甘膦喷施存活的T_0转化大豆分子鉴定为阳性 | 第68-69页 |
| 4.2.3 基于荚位的外源DNA进入胚囊路径分析 | 第69-70页 |
| 4.2.4 转基因后代材料的耐性鉴定 | 第70-73页 |
| 4.2.5 转基因T2材料遗传分析 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-76页 |
| 4.3.1 转基因后代遗传的复杂性 | 第74-75页 |
| 4.3.2 草甘麟逐代筛选可能会产生转基因恰合度代价 | 第75-76页 |
| 下一步工作计划 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91-92页 |
| 附表1 转化元件制备与质粒检测用引物序列表 | 第92-93页 |
| 附表2 最小化基因盒扩增用引物对退火温度与产物大小 | 第93页 |
