不同烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞毒性和炎性损伤的影响

【摘要】：目的：本实验通过研究4种非贵金属烤瓷合金(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)浸提液对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)活性及不同时间下(1h、2h、3h、6h)细胞产生炎性因子TNF-a水平的影响,比较4种非贵金属烤瓷合金的生物相容性,为临床选择良好的烤瓷修复体提供理论依据。方法：实验1、牙龈成纤维细胞原代培养。采用组织块法原代培养人牙龈成纤维细胞,倒置纤维镜下观察细胞形态并对第三代细胞进行免疫学鉴定,采用血球计数法绘制细胞生长曲线。实验2、MTT法检测烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞活性的影响。将4种非贵金属烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别浸透在含体积分数为10% FBS的DMEM液中。浸提7天后分别作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞48h,空白对照组为含体积分数为10%FBS的DMEM液,MTT比色法测定各组细胞的吸光度值,并计算其相对增殖率。实验3.ELISA法检测不同时间下烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞中炎性因子TNF-a水平的影响。将4种烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别在含体积分数为10% FBS的DMEM中浸提7天。用ELISA法测定人牙龈成纤维细胞与烤瓷合金浸提液作用1n、2h、3h、6h后各组烤瓷合金浸提液中牙龈成纤维细胞分泌的TNF-a的含量。结果：1、原代培养出牙龈成纤维细胞,镜下观察细胞呈梭形,具有长短不等的数个突起,核为卵圆形并靠近胞质中央,细胞成螺旋状、放射状或栅栏状。免疫组化鉴定Anti-Vimentin染色阳性,Anti-Cytokeratin染色阴性,为来源于中胚层的成纤维细胞。2、MTT结果显示,烤瓷合金浸提液与牙龈成纤维细胞作用48h后,各组细胞的相对增殖率从小到大依次为镍铬组77.78%、钛合金组79.01%、钴铬组85.19%和纯钛组98.77%,而且各组烤瓷金属的细胞毒性均为0级或1级。3、ELISA结果显示,烤瓷合金浸提液与牙龈成纤维细胞作用一段时间后,细胞培养上清液中的TNF-α呈现先上升后下降的趋势,并且细胞在浸提液中培养3h时TNF-α达到高峰。此时镍铬合金、钻铬合金和钛合金组的细胞培养上清液中TNF-α的含量会明显升高,且该三组之间差异有显著性(P≤0.05),而纯钛与空白组之间差异无显著性(P0.05)。结论：1、采用组织块培养法原代培养人牙龈成纤维细胞方法简单易行,可为从细胞分子生物学水平研究口腔材料的生物相容性提供实验基础。2、镍铬合金与钛合金的细胞毒性最大,其细胞毒性为1级；钴铬合金次之；纯钛的细胞毒性最小,其细胞毒性为0级。这4种烤瓷合金除纯钛材料外均对细胞有一定毒性,但其余3种合金也均在临床允许的范围内。3、镍铬合金、钴铬合金、钛合金可以促进人牙龈成纤维细胞分泌TNF-a,且对细胞增殖活性有显著影响；而纯钛对人牙龈成纤维细胞分泌TNF-a无影响,对细胞增殖活性亦无影响。由此说明纯钛烤瓷冠的生物相容性良好,适合临床广泛应用。
【关键词】：牙龈成纤维细胞 细胞培养 金属烤瓷合金 细胞毒性 肿瘤坏死因子-α
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R783.1