| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-14页 |
| ·单克隆抗体在应用上存在的问题及解决办法 | 第8-11页 |
| ·重组抗体片段 | 第8页 |
| ·人源化抗体 | 第8-11页 |
| ·真核蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第11-13页 |
| ·立题依据 | 第13-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-21页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·质粒和菌株 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·实验方法 | 第14-21页 |
| ·抗 FGF-1-mscFv 的重链和轻链可变区的人源化设计 | 第14-16页 |
| ·pET22b-mscFv 表达载体的构建 | 第16-17页 |
| ·Rosetta 感受态的制备 | 第17页 |
| ·鉴定 pET22b-mscFv 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第17-18页 |
| ·pET22b-mscFv 基因在大肠杆菌中周质腔的表达情况检测 | 第18页 |
| ·pET22b-hscFv 基因在大肠杆菌中的诱导表达条件优化 | 第18页 |
| ·免疫印迹法检测 pET22b-hscFv 在大肠杆菌周质腔中的诱导表达蛋白 | 第18-19页 |
| ·ELISA 检测 hscFv 与 FGF-1 结合活性 | 第19-21页 |
| 3 实验结果 | 第21-35页 |
| ·人源化设计和氨基酸译本的确定 | 第21-29页 |
| ·人源 FR 模板的选择 | 第21-23页 |
| ·各个 CDR 区的确定 | 第23-24页 |
| ·固定位置法分析框架区需要保留的鼠源残基 | 第24-25页 |
| ·对 mscFv 三维结构同源建模并分析重要的氨基酸残基 | 第25-26页 |
| ·氨基酸模板的确定以及密码子的优化 | 第26-29页 |
| ·人源化改造后的 VH 和 VL 的人源程度评价 | 第29页 |
| ·pET22b-mscFv 原核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·pET22b-mscFv 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·pET22b-hscFv 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31-33页 |
| ·免疫印迹法检测周质腔表达蛋白与 His 单抗结合的专一性 | 第33-34页 |
| ·ELISA 检测周质腔可溶蛋白 hscFv 与 FGF-1 结合活力 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
