| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-40页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·蛋白晶体学简介 | 第12-29页 |
| ·蛋白晶体学的发展历程 | 第13-15页 |
| ·DNA重组技术、蛋白质纯化和蛋白晶体筛选技术的发展 | 第14页 |
| ·同步辐射光源与高效探测器的应用 | 第14页 |
| ·蛋白晶体解析方法和计算程序的发展 | 第14-15页 |
| ·蛋白结晶的性质与机理 | 第15-20页 |
| ·蛋白晶体的性质 | 第16-17页 |
| ·蛋白结晶条件的筛选和优化 | 第17-18页 |
| ·过饱和、成核与生长 | 第18-20页 |
| ·蛋白结晶的方法 | 第20-22页 |
| ·微量配液结晶法 | 第20页 |
| ·蒸汽扩散法 | 第20-21页 |
| ·透析结晶法 | 第21页 |
| ·自由界面扩散法 | 第21页 |
| ·微流体技术 | 第21-22页 |
| ·蛋白结晶技术小结 | 第22页 |
| ·影响蛋白结晶的因素 | 第22-27页 |
| ·沉淀剂 | 第23-25页 |
| ·PH | 第25-26页 |
| ·温度 | 第26页 |
| ·蛋白的浓度和纯度 | 第26页 |
| ·其他影响因素 | 第26-27页 |
| ·蛋白结晶的问题与展望 | 第27-29页 |
| ·蛋白结晶中存在的问题 | 第27-28页 |
| ·蛋白结晶的前景与展望 | 第28-29页 |
| ·本论文中涉及的生物化学方法 | 第29-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·凝胶迁移实验 | 第30-31页 |
| ·Thermal shift assay | 第31-33页 |
| ·DNA footprint实验 | 第33页 |
| ·等温滴定量热实验 | 第33-34页 |
| ·FPLC蛋白纯化系统 | 第34-35页 |
| ·本论文的主要工作 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-40页 |
| 第二章 斑马鱼中去甲基化酶ALKBH5的结构和性质研究 | 第40-60页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·克隆、表达与纯化 | 第41-42页 |
| ·蛋白结晶和数据收集 | 第42页 |
| ·相位确定与数据优化 | 第42-43页 |
| ·基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 | 第43-44页 |
| ·高效液相色谱检测ALKBH5蛋白的生物活性 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-56页 |
| ·hALKBH5和fALKBH5蛋白的序列比对和活性检测 | 第44-47页 |
| ·△fALKBH5的结构和活性位点 | 第47-51页 |
| ·与其他AlkB家族蛋白的结构与序列对比 | 第51-53页 |
| ·FTO与fALKBH5蛋白活性位点附近的氨基酸比较 | 第53-56页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 第三章 NalD蛋白诱导MexAB-OprM多药耐药外排泵的分子机制研究 | 第60-84页 |
| ·引言 | 第60-62页 |
| ·实验方法 | 第62-67页 |
| ·NalD蛋白的构建、表达与纯化 | 第62-63页 |
| ·蛋白结晶 | 第63页 |
| ·数据采集和结构分析 | 第63-64页 |
| ·DNA footprint实验 | 第64页 |
| ·Pulll down实验 | 第64页 |
| ·Thermal shift实验 | 第64-65页 |
| ·凝胶迁移实验 | 第65页 |
| ·等温滴定量热实验 | 第65页 |
| ·构建绿脓杆菌Na1D突变菌株 | 第65-66页 |
| ·PMS402报告质粒的构建和荧光检测 | 第66-67页 |
| ·生长曲线 | 第67页 |
| ·细菌平板实验 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-79页 |
| ·使用DNA footprint实验确定NalD蛋白的结合位点 | 第67-69页 |
| ·体外实验中新生霉素诱导NalD蛋白从DNA上解离 | 第69-72页 |
| ·新生霉素对PAO1菌株的影响 | 第72-73页 |
| ·荧光测量 | 第73-74页 |
| ·NalD蛋白的晶体结构和氨基酸突变 | 第74-79页 |
| ·实验结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 第四章 基因工程改构NalD蛋白初探 | 第84-94页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-86页 |
| ·构建NalD-TetR改构蛋白 | 第85页 |
| ·NTN1和NTN2改构蛋白的表达与纯化 | 第85-86页 |
| ·凝胶迁移实验 | 第86页 |
| ·实验结果与讨论 | 第86-90页 |
| ·NalD蛋白与TetR蛋白结构比对 | 第86-88页 |
| ·改构蛋白的表达与优化 | 第88-90页 |
| ·EMSA实验验证改构蛋白活性 | 第90页 |
| ·实验总结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 结论 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 在读期间论文发表情况 | 第98页 |
