摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-16页 |
引言 | 第16-18页 |
第一章 文献综述 | 第18-24页 |
1. 燕窝概述 | 第18-21页 |
·燕窝的文献记载 | 第18页 |
·燕窝金丝燕的物种种类 | 第18-19页 |
·燕窝的组成成分及生物活性 | 第19-20页 |
·燕窝的鉴别 | 第20-21页 |
2. DNA条形码技术在中药材鉴别的应用 | 第21-22页 |
3. 实时荧光PCR技术在中药领域的应用 | 第22-24页 |
第二章 不同产地与品种商品燕窝的基原鉴定 | 第24-40页 |
1. 实验材料 | 第25-27页 |
·样品采集 | 第25-27页 |
·主要试剂 | 第27页 |
·主要仪器 | 第27页 |
2. 实验方法 | 第27-28页 |
·总DNA提取、PCR扩增及测序 | 第27页 |
·数据处理 | 第27-28页 |
3. 结果与分析 | 第28-37页 |
·PCR产物的电泳检测结果 | 第28-29页 |
·序列的校对和定位编号 | 第29页 |
·GenBank相似序列Blast结果分析 | 第29-30页 |
·燕窝样品在Cytb序列片段的变异位点分析 | 第30-31页 |
·燕窝样品基原物种基于Cytb基因的K2P遗传距离分析 | 第31-33页 |
·燕窝样品与Aerodramus属相近物种的NJ系统进化树 | 第33-37页 |
4. 讨论 | 第37-40页 |
·关于燕窝样品的基原 | 第37-38页 |
·样品准确序列的获取 | 第38页 |
·识别假基因对本分析的意义 | 第38页 |
·遗传距离及其计算模型的选择 | 第38-39页 |
·系统发生树的选择与作用 | 第39-40页 |
第三章 基于ND2基因序列的燕窝DNA条形码研究 | 第40-52页 |
1. 实验材料 | 第40-42页 |
·燕窝样品 | 第40页 |
·仪器 | 第40-42页 |
·试剂 | 第42页 |
2. 实验方法 | 第42页 |
·总DNA提取、PCR扩增及测序 | 第42页 |
·数据处理 | 第42页 |
3. 结果与分析 | 第42-51页 |
·ND2基因测序结果及编号 | 第42-43页 |
·GenBank相似序列Blast结果分析 | 第43-44页 |
·燕窝样品基于ND2基因序列的K2P遗传距离分析 | 第44-46页 |
·基于ND2序列的NJ系统发育树 | 第46-48页 |
·燕窝样品基原物种与Genbank下载ND2基因序列分析 | 第48-51页 |
4. 讨论 | 第51-52页 |
第四章 基于COI基因序列的燕窝DNA条形码研究 | 第52-63页 |
1. 实验材料 | 第52-53页 |
·燕窝样品 | 第52页 |
·仪器 | 第52页 |
·试剂 | 第52-53页 |
2. 实验方法 | 第53-54页 |
·总DNA提取 | 第53页 |
·PCR扩增及测序 | 第53-54页 |
·数据处理 | 第54页 |
3. 结果与分析 | 第54-62页 |
·实验样品测序结果 | 第54-56页 |
·GenBank相似序列Blast结果分析 | 第56页 |
·燕窝样品的COI基因序列分析 | 第56-58页 |
·燕窝样品基于COI基因序列的K2P遗传距离分析 | 第58-60页 |
·基于COI序列的NJ系统发育树 | 第60-62页 |
4. 讨论 | 第62-63页 |
第五章 基于12S rRNA基因序列的燕窝DNA条形码研究 | 第63-74页 |
1. 实验材料 | 第63-64页 |
·燕窝样品 | 第63页 |
·仪器 | 第63页 |
·试剂 | 第63-64页 |
2. 实验方法 | 第64-65页 |
·总DNA提取 | 第64页 |
·PCR扩增及测序 | 第64-65页 |
·数据处理 | 第65页 |
3. 结果与分析 | 第65-73页 |
·实验样品测序结果 | 第65-67页 |
·Blast最相似序列结果 | 第67页 |
·燕窝样品的12S rRNA基因序列分析 | 第67-69页 |
·燕窝样品基于12S rRNA基因序列的K2P遗传距离分析 | 第69-71页 |
·基于12S rRNA序列的NJ系统发育树 | 第71-73页 |
4. 讨论 | 第73-74页 |
第六章 燕窝的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别 | 第74-83页 |
1. 实验材料 | 第74-75页 |
·燕窝样品 | 第74-75页 |
·试剂 | 第75页 |
·仪器 | 第75页 |
2. 实验方法 | 第75-78页 |
·引物探针设计 | 第75-76页 |
·燕窝线粒体DNA提取 | 第76页 |
·阳性标准品的制备 | 第76页 |
·Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第76-77页 |
·标准曲线的建立 | 第77页 |
·实时荧光定量PCR检测方法的评价 | 第77-78页 |
3. 结果与分析 | 第78-82页 |
·燕窝Cytb目的基因的扩增和种属核实 | 第78-79页 |
·阳性标准品的拷贝数计算结果 | 第79页 |
·燕窝阳性标准品标准曲线的生成 | 第79-80页 |
·所设计Cytb基因引物探针的特异性检测结果 | 第80-81页 |
·所设计Cytb基因引物探针的灵敏度检测结果 | 第81页 |
·重复性和稳定性检测结果 | 第81-82页 |
4. 讨论 | 第82-83页 |
第七章 燕窝常见掺伪品种的PCR检测方法 | 第83-93页 |
1. 实验材料 | 第83-84页 |
·材料 | 第83页 |
·试剂 | 第83-84页 |
·仪器 | 第84页 |
2. 实验方法 | 第84-86页 |
·主要药物配制 | 第84页 |
·样品DNA的提取 | 第84-85页 |
·PCR扩增引物及反应体系 | 第85页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第85-86页 |
·样品制备及检测 | 第86页 |
·PCR产物的测序及物种鉴定 | 第86页 |
·检测市售燕窝样品是否含猪皮成分 | 第86页 |
3. 结果与分析 | 第86-91页 |
·纯猪皮与正品燕窝样品的PCR电泳结果 | 第86-87页 |
·含不同比例猪皮的燕窝样品的PCR电泳结果 | 第87-88页 |
·PCR产物的物种鉴定结果 | 第88-89页 |
·市售伪品燕窝的检测结果 | 第89-91页 |
4. 讨论 | 第91-93页 |
·DNA片段的选择 | 第91页 |
·关于DNA提取方法 | 第91页 |
·关于PCR操作 | 第91-92页 |
·电泳检测 | 第92页 |
·小结 | 第92-93页 |
结语 | 第93-96页 |
参考文献 | 第96-102页 |
附录 | 第102-112页 |
在校期间发表论文情况 | 第112-113页 |
致谢 | 第113-114页 |
统计学审核证明 | 第11页 |