| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一章 登革病毒NS3蛋白的生物信息学分析 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-18页 |
| ·核酸与氨基酸序列 | 第17页 |
| ·设备 | 第17页 |
| ·分析软件 | 第17-18页 |
| 2 方法 | 第18-19页 |
| ·获取DENV、JEV、TBEV、WNV、YFV的核酸及氨基酸序列 | 第18页 |
| ·分析登革Ⅱ型病毒NS3蛋白mRNA序列中潜在的稀有密码子 | 第18页 |
| ·多序列比对分析黄病毒属NS3蛋白氨基酸序列 | 第18页 |
| ·构建黄病毒属NS3蛋白的进化树 | 第18-19页 |
| ·分析及预测登革Ⅱ型病毒NS3蛋白理化性质及空间结构 | 第19页 |
| 3 结果 | 第19-26页 |
| ·登革Ⅱ型病毒NS3蛋白的mRNA序列稀有密码子的分析结果 | 第19页 |
| ·黄病毒NS3蛋白氨基酸序列的多序列比对结果 | 第19-20页 |
| ·黄病毒NS3蛋白进化树分析结果 | 第20-21页 |
| ·登革Ⅱ型病毒NS3蛋白理化性质及空间结构的预测 | 第21-26页 |
| 4 讨论 | 第26-29页 |
| ·非结构蛋白NS3中稀有密码子的预测 | 第26-27页 |
| ·NS3蛋白理化性质的分析及胞内定位预测 | 第27页 |
| ·NS3蛋白空间结构的分析及线性化B细胞表位的预测 | 第27-29页 |
| 第二章 登革Ⅱ病毒NS3蛋白的原核表达、鉴定及其生物学功能的初步探索 | 第29-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第29-36页 |
| ·病毒株、细胞株、菌株、质粒、抗体 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·实验所需的溶液及试剂 | 第30-35页 |
| ·主要仪器及其产家 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-45页 |
| ·病毒RNA的制备 | 第36-37页 |
| ·质粒提取 | 第37页 |
| ·扩增NS3全长基因 | 第37-39页 |
| ·pET32a-NS3重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·pET32a-NS3重组质粒在BL21(DE3)中的诱导表达 | 第41页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第41-43页 |
| ·表达蛋白的Western-blot鉴定 | 第43页 |
| ·融合蛋白表达形式的鉴定 | 第43-44页 |
| ·纯化的重组蛋白生物学功能探讨 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| ·NS3基因的PCR扩增 | 第45页 |
| ·pET32a-NS3重组质粒双酶切、PCR及核苷酸测序鉴定 | 第45-47页 |
| ·pET32a-NS3/BL21(DE3)重组菌融合蛋白的诱导表达及表达形式的鉴定 | 第47-48页 |
| ·pET32a-NS3/BL21(DE3)表达的融合蛋白的鉴定 | 第48-49页 |
| ·MTT法鉴定重组蛋白的竞争性抑制病毒进入细胞的分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·登革Ⅱ型病毒非结构蛋白NS3在大肠埃希菌中的表达 | 第50-51页 |
| ·重组菌表达条件的摸索 | 第51页 |
| ·纯化蛋白的免疫反应性的分析 | 第51-52页 |
| ·纯化的NS3蛋白的生物学功能 | 第52-53页 |
| 第三章 登革Ⅱ型病毒NS3蛋白的真核表达及其生物学功能初步探索 | 第53-69页 |
| 1 材料与方法 | 第53页 |
| ·实验材料与试剂 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-61页 |
| ·NS3基因扩增 | 第53-55页 |
| ·pcNS3P、pcNS3H和pcNS3表达质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·pcNS3P、pcNS3H和pcNS3转染BHK-21细胞 | 第57-59页 |
| ·非结构蛋白NS3及其结构域的生物学功能研究 | 第59-61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| ·NS3P、NS3H及NS3全长基因的PCR扩增 | 第61-62页 |
| ·pcNS3P、pcNS3H和pcNS3重组质粒双酶切、PCR及核苷酸测序鉴定 | 第62-64页 |
| ·重组pcNS3P、pcNS3H和pcNS3蛋白的表达与鉴定 | 第64-66页 |
| ·非结构蛋白NS3及其结构域的生物学功能研究 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 附录(缩略语词汇表) | 第75-76页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
