| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·我国观赏花卉应用发展现状 | 第10-11页 |
| ·花卉育种研究 | 第10-11页 |
| ·花卉药用价值的开发 | 第11页 |
| ·植物花瓣彩斑的研究 | 第11-13页 |
| ·植物花色的定义 | 第11页 |
| ·植物花瓣彩斑的概念与分类 | 第11-12页 |
| ·植物花瓣彩斑产生的原因 | 第12-13页 |
| ·花斑形成分子机理研究进展 | 第13-18页 |
| ·与花斑形成相关的基因 | 第13-16页 |
| ·转座因子与花斑产生 | 第16-17页 |
| ·启动子特异性与花斑产生 | 第17页 |
| ·RNA干扰在花斑形成中的作用 | 第17-18页 |
| ·甲基化导致的花斑形成 | 第18页 |
| ·病毒与花斑的形成 | 第18页 |
| ·F3’H基因研究进展及其与色斑形成关系 | 第18-19页 |
| ·三色堇相关的花瓣彩斑研究进展 | 第19-20页 |
| ·研究目的及意义 | 第20-21页 |
| ·研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 2 三色堇F3’H基因的克隆和表达载体的构建 | 第22-40页 |
| ·实验设备与实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂盒 | 第22页 |
| ·RNA提取试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基的配置 | 第23页 |
| (1) SOC培养基 | 第23页 |
| (2) LB培养基 | 第23页 |
| ·供试菌种及载体 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·三色堇RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·三色堇叶片cDNAβ-actin基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·三色堇F3’H基因的克隆 | 第25-30页 |
| (1) cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| (2) cDNA 3’端片段的合成 | 第25-26页 |
| (3) cDNA 5’端片段的合成 | 第26-27页 |
| (4) 三色革F3’H基因cDNA全长的克隆 | 第27-28页 |
| (5) PCR产物目的片段回收 | 第28-29页 |
| (6) 连接反应 | 第29页 |
| (7) 转化感受态细胞 | 第29页 |
| (8) PCR验证 | 第29-30页 |
| ·pXCS-VwF3’H表达载体的构建 | 第30-32页 |
| (1) 酶切体系 | 第30-31页 |
| (2) 酶切产物回收 | 第31页 |
| (3) 酶切产物连接 | 第31页 |
| (4) 进行转化与PCR阳性克隆的鉴定 | 第31页 |
| (5) 提取重组子质粒pXCS-VwF3’H | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·三色堇花瓣RNA的提取 | 第32页 |
| ·三色堇cDNAβ-actin基因的克隆 | 第32页 |
| ·三色堇F3’H基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·F3’H基因的生物信息学分析 | 第33-37页 |
| (1) F3’H蛋白质的基本理化性质预测 | 第33-34页 |
| (2) F3’H蛋白质修饰位点的预测 | 第34页 |
| (3) F3’H蛋白的二级结构分析 | 第34-35页 |
| (4) F3’H基因氨基酸序列分析 | 第35-37页 |
| (5) 三色堇F3’H基因氨基酸序列的系统进化分析 | 第37页 |
| ·pXCS-VwF3’H表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·三色堇花瓣RNA提取中应注意的问题 | 第38-39页 |
| ·三色堇F3’H基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3 三色堇ANS和DFR基因启动子的克隆 | 第40-52页 |
| ·实验材料与试剂 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·DNA提取试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·三色堇DNA的提取 | 第40页 |
| ·三色堇DNAβ-actin基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·三色堇ANS和DFR基因启动子的克隆 | 第41-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-49页 |
| ·CTAB法,改良CTAB法,SDS法提取效果的比较 | 第43-44页 |
| (1) DNA质量的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第43页 |
| (2) DNA浓度的紫外分光检测 | 第43-44页 |
| ·不同质量的起始叶片材料对改良CTAB法提取DNA的影响 | 第44-45页 |
| ·三色堇叶片DNAβ-actin基因的序列分析 | 第45-48页 |
| (1) DNAβ-actin基因的核苷酸序列 | 第45页 |
| (2) β-actin基因氨基酸序列的同源性分析 | 第45-46页 |
| (3) β-actin cDNA和β-actin DNA核苷酸序列比对分析 | 第46-47页 |
| (4) β-actin基因系统进化树比较 | 第47-48页 |
| ·三色堇ANS和DFR基因启动子的克隆 | 第48-49页 |
| (1) PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第48-49页 |
| (2) 三色堇ANS与DFR基因片段序列分析 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·三色堇叶片DNA提取的中应注意的问题 | 第49-50页 |
| ·ANS、DFR基因启动子的克隆 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| ·F3’H基因表达特性分析 | 第53页 |
| ·ANS、DFR基因启动子表达特性分析 | 第53-54页 |
| ·三色堇花斑形成的分子机理推测 | 第54-56页 |
| 6 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
