代谢工程改造大肠杆菌生产L-蛋氨酸
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·L-蛋氨酸简介 | 第8页 |
| ·蛋氨酸理化性质 | 第8页 |
| ·蛋氨酸的应用 | 第8-10页 |
| ·饲料添加 | 第8-9页 |
| ·医药 | 第9页 |
| ·其它应用方向 | 第9-10页 |
| ·蛋氨酸生产概况 | 第10-12页 |
| ·氨基酸生产进展 | 第10页 |
| ·蛋氨酸生产方法 | 第10-11页 |
| ·国内外蛋氨酸生产现状 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌蛋氨酸代谢过程 | 第12-13页 |
| ·产 L-蛋氨酸工程菌构建策略 | 第13-14页 |
| ·切断或削弱支路代谢 | 第13页 |
| ·解除反馈调节 | 第13页 |
| ·增加前体物质 | 第13-14页 |
| ·降低蛋氨酸的消耗 | 第14页 |
| ·促进蛋氨酸的排出 | 第14页 |
| ·发酵法生产蛋氨酸研究进展 | 第14-15页 |
| ·国内研究进展 | 第14页 |
| ·国外研究进展 | 第14-15页 |
| ·立题意义与研究内容 | 第15-17页 |
| ·立题依据与意义 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-27页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第17-18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·培养基及培养方法 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·培养方法 | 第19页 |
| ·分子生物学方法 | 第19-22页 |
| ·凝胶电泳 | 第19页 |
| ·试剂盒使用 | 第19页 |
| ·目的片段的扩增 | 第19-21页 |
| ·基因片段的酶切和连接 | 第21页 |
| ·大肠杆菌化学感受态的制备与转化 | 第21页 |
| ·大肠杆菌电转化感受态的制备与电转化 | 第21-22页 |
| ·基因敲除 | 第22-24页 |
| ·基因敲除原理 | 第22页 |
| ·基因敲除方法 | 第22-24页 |
| ·诱变育种 | 第24页 |
| ·紫外诱变条件的确定 | 第24页 |
| ·乙硫氨酸致死浓度的确定 | 第24页 |
| ·蛋氨酸高产菌株的筛选 | 第24页 |
| ·质粒构建 | 第24-25页 |
| ·发酵优化 | 第25页 |
| ·培养基组分优化 | 第25页 |
| ·摇瓶培养发酵条件优化 | 第25页 |
| ·测定方法 | 第25-27页 |
| ·菌浓(OD600)的测定 | 第25页 |
| ·蛋氨酸浓度测定 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-43页 |
| ·metJ 基因敲除 | 第27-28页 |
| ·metJ 基因的功能 | 第27页 |
| ·metJ 基因的敲除 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28页 |
| ·诱变育种 | 第28-30页 |
| ·大肠杆菌生长曲线的制作 | 第28页 |
| ·紫外曝光时间的确定 | 第28-29页 |
| ·乙硫氨酸致死浓度的确定 | 第29页 |
| ·突菌株的获得 | 第29页 |
| ·YB12 菌株的遗传稳定性检验 | 第29-30页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·构建原理 | 第30页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第30页 |
| ·重组质粒对蛋氨酸产量的影响 | 第30-31页 |
| ·发酵培养基组分优化 | 第31-39页 |
| ·单因素实验 | 第31-35页 |
| ·Placktt-Burman 实验 | 第35-36页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第36页 |
| ·Box-Behnken 实验 | 第36-38页 |
| ·培养基最佳组分确定及验证 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39页 |
| ·摇瓶培养发酵条件的优化 | 第39-43页 |
| ·初始培养基 pH 对蛋氨酸积累的影响 | 第39-40页 |
| ·发酵温度对蛋氨酸积累的影响 | 第40页 |
| ·装液量对蛋氨酸积累的影响 | 第40-41页 |
| ·接种量对蛋氨酸积累的影响 | 第41页 |
| ·IPTG 诱导浓度对蛋氨酸积累的影响 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 主要结果与展望 | 第43-44页 |
| 主要结果 | 第43页 |
| 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
